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目的:乳腺癌已超过肺癌成为全球最常见的癌症,且患者年龄趋于年轻化,但是,在治疗上仍亟需研发更为有效的治疗方法,提高患者生存率。根据分子分型,乳腺癌可分为以下四种:LuminalA型、LuminalB型、HER-2过表达型和三阴性乳腺癌。目前,乳腺癌的治疗方法主要有:手术、放疗、化疗、内分泌治疗（针对表达雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的乳腺癌）和靶向治疗（抗HER-2治疗）。三阴性乳腺癌由于其表面雌激素受体、孕激素受体和HER2均低表达,因而缺乏有效的靶向药物。开发三阴性乳腺癌的潜在治疗靶点具有重要的科学研究意义和临床应用价值。热休克蛋白60（Heat Shock Protein 60,HSP60）是一种重要的分子伴侣,属于热休克蛋白（Heat Shock Protein,HSP）家族,存在于所有的原核生物和真核生物的线粒体、高尔基体、细胞质和细胞膜上。HSP60在肿瘤发生中能够抑制线粒体凋亡,并且促进肿瘤组织中的血管生成和癌症转移。越来越多的研究表明,HSP60在乳腺癌组织或细胞中的含量显著高于正常的组织或细胞。从正常乳腺上皮细胞到原位导管癌再到侵袭性乳腺癌,HSP60的含量逐渐增加。这表明,HSP60可能成为乳腺癌的诊断标志物或潜在的治疗靶点。所在实验室前期研发出了一种能够与HSP60特异性结合的多肽（命名为P17）。本研究拟将此靶向多肽与金纳米颗粒（Gold nanoparticles,AuNPs）相结合,构建光热治疗用靶向金纳米颗粒,在小鼠三阴性乳腺癌细胞株4T1细胞上研究其光热杀伤效果。金纳米颗粒作为光热转换剂具有光热转换效率高的优势,同时它的生物相容性好,表面易于修饰;而光热疗法具有高选择性和低副作用的优点,是一种新的肿瘤治疗方法。方法:首先,使用柠檬酸钠还原氯金酸HAuCl4制备AuNP;使用透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope,TEM）对 AuNP 的形貌进行表征。使用人工合成多肽P17修饰AuNP,制备得到连接了 P17的AuNP（AuNP-P17）,通过紫外-可见-近红外吸收光谱（UV-vis-NIR spectroscopy）获得AuNP-P1 7的特征光谱;通过动态光散射方法（Dynamic Light Scattering,DLS）检测AuNP-P17的粒径和Zeta电势。使用流式细胞术检测小鼠乳腺癌细胞株4T1细胞表面和细胞内的HSP60的表达、P17与4T1细胞的结合。使用倒置显微镜观察AuNP和AuNP-P17被4T1细胞的摄取情况。使用便携式热电偶温度计测定4T1细胞与AuNP或AuNP-P17孵育24 h后经激光照射2或4 min的温度。采用CCK-8试剂盒测定不同浓度P17、AuNP和AuNP-P17在光照前后对4T1细胞活性的影响。结果:AuNP呈颗粒状,大小均匀,并且分散性好;在528 nm左右具有经典SPR单峰。当与P17共孵育后,随P17浓度的增加,AuNP的SPR吸收峰强度有所降低,且长波处吸收值抬高,表明P17连接到AuNP上。DLS结果显示,AuNP表面连接P17后,平均粒径随着P17比例增加而增大,从（51.8±0.1）nm变为（52.1± 2.2）、（60.8±1.9）和（64.5 ± 2.5）nm。Zeta电势从（-29.3± 0.3）mV变为（-29.6±0.6）、（-26.4±0.4）和（-26.9±2.5）mV。流式细胞术结果显示,在4T1细胞膜和细胞内均有HSP60表达。P17能够与4T1细胞膜上和细胞内HSP60有效结合。细胞活性实验结果表明,P17在20μM范围以下对4T1细胞的活性几乎没有影响;与此同时,在金原子浓度不超过100μg/mL浓度下,AuNP或AuNP-P17对4T1细胞的活性均无显著影响。这些结果说明,P17、AuNP和AuNP-P17本身具有良好的生物相容性。倒置显微镜观察结果显示,在两种纳米颗粒与4T1细胞共孵育4、6或8h时,AuNP处理组与对照组相比,细胞颜色无明显变化,表明AuNP与4T1细胞的结合不明显;而AuNP-P17处理组的细胞中可见金纳米颗粒的红色,说明AuNP-P17与4T1细胞的结合非常明显,P17促进了4T1细胞对金纳米颗粒的摄取,表明AuNP-P17具有靶向性。当4T1细胞在与AuNP和AuNP-P17共孵育后,被激光照射时其培养基温度发生变化,AuNP-P17处理组在激光照射4分钟后,培养基的温度从（22.9±0.4）℃升高到（52.0±3.9）℃;对于AuNP处理组,细胞培养基的温度只升高到（47.2±0.6）℃,而对照组仅升温到（38.2±2.4）℃。细胞活性检测结果显示,在激光照射2分钟时,AuNP、AuNP-P17处理组的细胞活性与对照组相比,无显著性变化。当激光照射4分钟后,AuNP-P17处理组细胞的相对活性降低到（1.3±2.8）%,AuNP处理组的细胞相对活性降低到了（64.1±6.8）%,而对照组细胞的相对活性与无激光照射时无显著性差异（100.0±3.2）%。各组之间两两比较具有显著性差异（***:p<0.001）。结果表明,AuNP-P17相比AuNP,其对4T1细胞的光热杀伤效应得到显著性增强。结论:本研究基于乳腺癌细胞中高表达HSP60这一特征,使用HSP60特异性结合的多肽P17修饰AuNP,构建了靶向乳腺癌细胞4T1的光热杀伤系统AuNP-P17。这种纳米颗粒的细胞毒性低,具有良好的生物相容性,同时显著增强了细胞对AuNP-P17的摄取。在各组细胞中,与AuNP-P17共孵育后的4T1细胞在激光照射下温度升高幅度显著,表明AuNP-P17具有靶向性和光热效应,实现了对4T1细胞的高效光热杀伤。因此,靶向HSP60可增强AuNP对4T1细胞的光热杀伤作用,在三阴性乳腺癌治疗方面具有进一步深入研究和转化的潜力。