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第一章Wnt/β-catenin信号通路相关的长链非编码RNA调控三阴性乳腺癌恶性进程中的分子机制研究目的:寻找在三阴性乳腺癌中与Wnt/β-catenin通路密切相关的长链非编码RNA,并探索长链非编码RNA与Wnt/β-catenin之间的作用机制,及结合临床三阴性乳腺癌病人标本的临床数据探讨长链非编码RNA的临床意义。方法:将构建的Flag-β-catenin质粒瞬转进入三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231,后进行RIP实验,将沉淀下来的RNA送测序检测,通过测序的方法筛选出在三阴性乳腺癌中与Wnt/β-catenin显著相关的长链非编码RNA,qRT-PCR、FISH、核浆分离和3?、5?RACE检测长链非编码RNA的表达、核浆定位及全长。Western-blot、FISH、免疫荧光、RNA pull-down和IP实验探索长链非编码RNA与Wnt/β-catenin之间的相互作用机制。运用RNA原位杂交和qRT-PCR检测长链非编码在临床组织样本中的表达,采用Kaplan-Meier生存分析来评价长链非编码RNA的表达与三阴性乳腺癌病人总生存预后的关系。结果:通过测序的结果筛选出长链非编码RNA CTC-444N24.11,其在三阴性乳腺癌中显著高表达于Luminal型和HER-2+型乳腺癌,并与Wnt/β-catenin通路密切相关。CTC-444N24.11长度约为4600bp、主要定位在胞浆、与三阴性乳腺癌病人预后呈负相关的长链非编码RNA,其分子机制为通过抑制β-catenin磷酸化而使β-catenin活化入核从而激活了Wnt/β-catenin信号通路,促进下游基因转录生成。活化后的Wnt/β-catenin又正反馈促进CTC-444N24.11的转录生成。结论:长链非编码RNA CTC-444N24.11通过活化Wnt/β-catenin信号通路从而促进三阴性乳腺癌的恶性进程,并且CTC-444N24.11可以作为判断三阴性乳腺癌病人不良预后预后的指标之一。第二章B7-H4在乳腺癌预后的临床意义研究目的:探索B7-H4与乳腺癌病人生存预后之间的相关性。方法:利用免疫组织化学检测B7-H4在乳腺癌组织切片中的表达情况,利用SPSS19.0软件(IBM,Armonk,New York,USA)对实验数据结果进行处理。用GraphPad Prism 5.0分析B7-H4与乳腺癌病人临床病理特征的相关性,采用Kaplan-Meier生存分析法分析B7-H4对乳腺癌患者总生存率的影响。结果:我们发现,B7-H4在乳腺癌中整体呈强阳性表达,并与病人的pTNM分期、总生存期和P53的表达具有相关性,单因素分析表明异常表达B7-H4的病人预后较差,多因素分析表明B7-H4是乳腺癌患者的独立预后因子。结论:B7-H4能够作为乳腺癌不良预后的独立因子。