论文部分内容阅读
目的:筛选与肺腺癌预后相关的差异表达RNA结合蛋白(RNA-binding proteins,RBPs),并探讨RNA结合蛋白BOP1在肺腺癌中的表达情况、临床价值及潜在的生物学功能和作用机制。方法:(1)利用R软件包分析肺腺癌基因表达数据,筛选出与患者预后相关的差异表达RBPs编码基因,通过共表达网络分析、LASSO回归分析和生存分析获得与肺腺癌预后相关的核心RBPs。(2)利用多组学资料分析BOP1在33种肿瘤中的表达及预后价值,并探讨BOP1基因在肺腺癌中的突变、拷贝数改变情况,以及与患者临床结局的关系。(3)利用免疫组织化学技术及荧光定量PCR法验证BOP1在肺腺癌组织和细胞中的表达情况。(4)利用慢病毒转染的方法构建BOP1过表达及低表达的肺腺癌A549和PC-9细胞模型,通过克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分析肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。(5)利用蛋白印迹和/或荧光定量PCR法检测BOP1过表达及敲低表达的肺腺癌A549和PC-9细胞中相关基因的表达情况。(6)利用BOP1过表达及沉默的A549细胞构建裸鼠荷瘤模型,结合免疫组织化学技术进一步验证BOP1促进肺腺癌生长的机制。结果:(1)筛选出124个在肿瘤组织中高表达的RBPs和40个低表达的RBPs,其中BOP1、EXO1、GAPDH、IGF2BP1和SMAD9是与肺腺癌患者的总生存期(Overall survival,OS)紧密相关的关键 RBPs。(2)BOP1的mRNA在肺腺癌等27种肿瘤中表达异常,其表达与肺腺癌等14种肿瘤患者的OS相关,BOP1蛋白至少在肺腺癌等6种肿瘤中的水平显著高于正常组织。(3)肺腺癌细胞中BOP1的表达高于正常支气管上皮细胞(P<0.05),肺腺癌组织中BOP1的表达高于癌旁的肺组织(P<0.05),其表达与肿瘤的大小和临床分期呈正相关(P<0.05),与患者的OS及疾病特异性生存期(Disease-specific survival,DSS)呈负相关(P<0.05),且高BOP1的患者更容易出现淋巴结转移。(4)在肺腺癌中BOP1的表达与肿瘤发生、免疫调节、上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)、DNA 损伤修复、RNA 加工和细胞周期等相关的通路密切相关。(5)BOP1表达上调的PC-9以及A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著高于对应的野生型肺腺癌细胞及转染空载体的肺腺癌细胞(P<0.05),而BOP1沉默的A549和PC-9细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱(P<0.05)。(6)BOP1过表达细胞中JNK和磷酸化JNK(p-JNK)的表达均较对照组显著增加(P<0.05),且Snail、N-cadherin的表达明显增加,E-cadherin的表达显著减少(P<0.05),VEGFA和PCNA的表达均显著升高(P<0.05);而下调BOP1后 JNK、p-JNK、Snail、N-cadherin、VEGFA 和 PCNA 的表达均显著减少(P<0.05),E-cadherin的表达显著增加(P<0.05);利用JNK抑制剂SP600125处理BOP1过表达的肺腺癌A549和PC-9细胞后,与对照组比,BOP1对JNK及c-Jun的磷酸化的促进作用明显被减弱(P<0.05),BOP1的过表达对Snail、N-cadherin、PCNA、VEGFA表达的促进效应以及对E-cadherin表达的抑制效应均显著减弱(P<0.05)。(7)BOP1过表达能显著促进移植瘤的生长,而BOP1下调组移植瘤的生长速度明显变慢,两组间肿瘤重量及体积均存在明显差异(P<0.05);SP600125干预后,移植瘤的生长呈现出抑制的趋势,但与对照组比,BOP1过表达组移植瘤的重量和体积均无统计学差异(P>0.05);而BOP1下调的移植瘤体积显著减小(P<0.05),但移植瘤重量在两组之间无统计学差异(P>0.05);和转染空载的移植瘤组相比,过表达组移植瘤组织中Ki67的阳性细胞比例显著增高(P<0.05)。(8)与BOP1低表达的肺腺癌组织相比较,BOP1高表达的组织中微血管密度(Microvessel density,MVD)计数明显增多(P<0.01),且在肿瘤样本中MVD数目与BOP1的表达呈正相关(r=0.443,P<0.01)。结论:(1)肺腺癌肿瘤组织和癌旁肺组织之间存在差异表达的RBPs,其中BOP1、EXO1、GAPDH、IGF2BP1和SMAD9是与肺腺癌患者的总生存期密切相关的关键RBPs。(2)BOP1在肺腺癌组织和细胞中表达上调,其水平与患者肿瘤的大小和临床分期具有正相关性,与患者的OS及DSS存在负相关性,且BOP1高表达的患者更容易出现肿瘤细胞淋巴结转移。(3)BOP1过表达促进肺腺癌PC-9和A549细胞的增殖、迁移和侵袭。(4)BOP1通过激活JNK/c-Jun信号通路调控EMT和血管生成过程,促进肺腺癌的生长和进展。