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目的:本研究通过临床组织检测细胞周期素D1(Recombinant Cyclin D1,CCND1)及Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达;在细胞水平检测宫颈癌HeLa细胞中CCND1及Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达,采用黄芩素对其细胞系进行干预,观察上述相关因子的变化,初步明确黄芩素在宫颈癌细胞发挥的作用;通过通路阻断剂对Wnt/β-catenin信号通路阻断,观察黄芩素的作用效果,进一步明确其作用路径;构建宫颈癌动物模型,对其采用黄芩素进行干预,检测CCND1及Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达,进一步明确黄芩素对宫颈癌侵袭转移的抑制效果。方法:选择我院经病理确诊的宫颈癌组织标本50例以及癌旁组织46例。所有患者均符合宫颈癌诊断标准,术前均未接受过化疗或放疗,记录患者宫颈癌临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移以及组织分化情况等临床病理资料,采用免疫印迹实验从临床组织水平研究CCND1、Wnt/β-catenin通路相关分子在宫颈癌中的表达;选择宫颈癌HeLa细胞株,用含有10%小牛血清的DMEM培养基在含5%CO2、37℃饱和湿度的培养箱中培养,0.25%胰蛋白酶消化传代,从形态学、核酸及蛋白水平探究黄芩素对宫颈癌细胞的作用机制,采用CO-IP方法检测各相关分子之间的作用关系;选择本院动物实验室提供的小鼠50只,全部雌性。选择细胞实验中对黄芩素最为敏感的细胞株。在每只小鼠的两后爪垫及背部皮下各接种2.5×10~6个活的宫颈癌细胞,荷瘤成功后,将成模小鼠按照干预方法随机分为4组(各组分别为8只):对照组:瘤内注射0.1ml NS为阴性对照组;黄芩素组:瘤内注射黄芩素为阳性对照组,低剂量组:瘤内给黄芩素20mg/kg;中等剂量组:瘤内给黄芩素40mg/kg;黄芩素高剂量组:瘤内给黄芩素80mg/kg。观察各组小鼠成瘤情况及实验前后的一般生长情况,各组于治疗前及治疗后15天各用游标卡尺测量肿瘤大小、淋巴结转移粒数。治疗15天后处死小鼠,剥离肿瘤称瘤重并计算抑瘤率,Western blot及荧光定量PCR检测CCND1及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、质内蓬乱蛋白Dsh、肿瘤抑制基因APC、丝氨酸蛋白激酶3GSK3及基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。结果:(1)在CCND1方面,宫颈癌组织与癌旁组织相比,长转录本转录量相对较低,但无统计学差异(P>0.05),短转录本转录量在宫颈癌组织中的表达明显降低,P<0.05,差异具有统计学意义。短转录本转录量相对于长转录本转录量的倍数,在组间存在明显的统计学差异(P<0.05)。在β-catenin方面,宫颈癌组织中β-catenin异常表达率为78.00%,癌旁组织的异常表达率为34.78%(P<0.05)。在Dsh方面,宫颈癌组织和癌旁组织中Dsh的表达无统计学差异(P>0.05)。在APC方面,宫颈癌组织中阴性表达和弱表达率显著高于癌旁组织,正常表达率显著低于癌旁组织(P<0.05)。在GSK3方面,宫颈癌组织的GSK3表达显著低于癌旁组织(P<0.05)。在MMP9方面,宫颈癌组织中阴性表达和弱阳性率显著低于癌旁组织,强阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。(2)不同组别的HeLa细胞迁移能力存在明显差异,而黄芩素的应用和抑制Wnt/β-catenin通路均可以有效抑制HeLa细胞的迁移能力,同时,联合应用对于HeLa细胞的迁移能力抑制效果更佳。不同组别的HeLa细胞侵袭能力存在明显差异,而黄芩素的应用和抑制Wnt/β-catenin通路均可以有效抑制HeLa细胞的侵袭能力,同时,联合应用对于HeLa细胞的侵袭能力抑制效果更佳。黄芩素联合信号通路抑制干预HeLa细胞,CCND1和Wnt/β-catenin通路相关蛋白方面(β-catenin、Dsh、APC、GSK3、MMP9)发生显著变化:β-catenin、CCND1、Dsh、MMP9表达下调,APC、GSK3表达上调,β-catenin在胞质内磷酸化而降解,引发Wnt/β-catenin信号通路失活,使得宫颈癌细胞的生物学活动被抑制。(3)在肿瘤生长体积方面,对照组与黄芩素组存在明显的统计学差异(P<0.05),而且,宫颈癌小鼠肿瘤生长情况存在明显的剂量依赖性(P<0.05)。在淋巴结转移数量方面,对照组与黄芩素组存在明显的统计学差异(P<0.05),而且,宫颈癌小鼠淋巴结转移数量存在明显的剂量依赖性(P<0.05)。在抑瘤率方面,与对照组相比,黄芩素高剂量与中剂量组瘤重显著降低,抑瘤率显著提升,而且,存在明显的剂量依赖性(P<0.05)。黄芩素干预后,CCND1和Wnt/β-catenin通路相关蛋白方面(β-catenin、Dsh、APC、GSK3、MMP9)发生明显改变,组间比较显示,中剂量组、高剂量组显著优于对照组。中剂量组和高剂量组的β-catenin、Dsh、APC、GSK3、MMP9蛋白表达的变化程度大于低剂量组(P<0.05)。结论:(1)与癌旁组织相比,宫颈癌组织CCND1表达降低,宫颈癌组织中β-catenin异常表达率升高,宫颈癌组织中阴性表达和弱表达率显著升高,宫颈癌组织的GSK3表达显著降低,宫颈癌组织中阴性表达和弱阳性率显著降低,在Dsh表达中无明显差异。(2)黄芩素的应用,能够让Wnt/β-catenin通路得到抑制,进一步控制宫颈癌的进展和转移,CCND1、Dsh、MMP9表达下调,APC、GSK3表达上调,β-catenin在胞质内磷酸化而降解,引发Wnt/β-catenin信号通路失活,使得宫颈癌细胞的生物学活动被抑制。(3)黄芩素的应用,能够有效控制肿瘤生长体积,减少淋巴结的转移,降低瘤重,提升抑瘤率,使得CCND1和Wnt/β-catenin通路相关蛋白方面(β-catenin、Dsh、APC、GSK3、MMP9)发生明显改变,且存在明显的剂量依赖性。