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肿瘤干细胞假说认为肿瘤中存在一小部分亚群细胞,其生长特性类似与正常干细胞,具有自我更新,维持肿瘤生长和保持肿瘤异质性的能力。虽然该理论远未成熟,而且还存有诸多科学问题亟待解决,但经过学者们不懈努力,越来越多的证据和实验结果均证实了肿瘤干细胞的存在。2009年,Takaishi等从胃癌细胞系中分离得到了CD44表达阳性的细胞亚群,这些CD44+细胞具有肿瘤干细胞自我更新和肿瘤异质性的能力,还能够对化、放疗诱导的细胞程序性凋亡产生抵抗作用。目的：选择CD44作为分离标记,研究其在胃癌原发灶及转移灶组织内的表达,通过酶消化联合化疗药物筛选法分离胃癌干细胞,并对原代分离培养的胃癌干细胞的表型进行检测。以MicroRNA和CD44之间表达平衡为突破口,研究应激性反应原如何作用与这两者之间平衡影响干细胞的表型形成,为进一步从新的角度揭示胃癌发生发展的可能分子机制,并针对肿瘤干细胞为靶点,为开辟早期诊断、治疗胃癌的新途径奠定方法和理论基础。方法：所有细胞培养均使用10%胎牛血清,加入配好的抗生素液体中(青／链霉素100U／mL、100μg／mL)。细胞表型检测使用流式细胞仪(BD FACSCalibur)分选,未加荧光标记一抗的肿瘤细胞作为空白对照。Western blot检测CD44、Lin28在胃癌原发灶和转移灶的表达。半定量RT-PCR及实时定量PCR检测miR-373的表达,双萤光素酶检测分析STAT3和AP-1表达水平,实时定量PCR检测异丙肾上腺素处理后胃癌细胞系表面标记Rex-1和Nanog表达,Westernblot结果表明β-肾上腺素受体在胃癌原发灶及转移灶表达。结果：虽然胃癌原发灶及转移灶内均存在着CD44+亚群细胞,但是相比原发灶,转移灶内CD44+亚群细胞的比例显著上调(约30倍)。Western blot检测从蛋白水平上证实了CD44、Lin28在胃癌原发灶和转移灶组织内存在着表达差异。化疗药物筛选培养结果显示,CD44+亚群细胞能够对奥沙利铂产生抵抗,并且能够逃避奥沙利铂诱导产生的细胞程序性死亡。筛选培养后CD44+细胞不但具有强大的分离增殖能力,而且能够在体外培养形成球体克隆。miR-373在胃癌原发灶及转移灶组织存在表达差异。miR-373在原发灶内表达的量远远高于其在转移灶内的表达量。miR-373可能通过正向调控E-cadher in影响EMT,从而影响肿瘤细胞的侵袭能力。miR-373能够在体内和体外抑制CD44的表达,影响胃癌干细胞的表型转化。miR-373的启动子区域含有STAT3和AP-1结合位点,其上游信号通路活化后,通过激活STAT3信号通路和JNK／SAPK信号通路,抑制miR-373的功能,间接地促进CD44的表达,使细胞表型向胃癌干细胞的方向发生偏移。应激性反应原与其受体结合后,激活β肾上腺素受体-cAMP-PKA信号通路,从而上调STAT3和c-Jun的表达水平,影响miR-373的剪切及成熟,间接地抑制CD44的表达及胃癌干细胞的表型形成。结论：转移灶内CD44+亚群细胞的所占的比例明显高于原发灶,CD44在胃癌原发灶及转移灶组织内的表达差异可能与胃癌的侵袭、复发和转移有关,miR-373与肿瘤的侵润和转移有着一定的联系,当慢性应激导致的神经内分泌系统改变时,通过影响miR373和CD44之间的表达平衡,肿瘤细胞的表型可能向胃癌干细胞的方向发生偏移,并表达Rex-1、Nanog等维持干细胞“干”性的表面标记。