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MHC-I类链相关基因A(MHC class I related chains A,MICA)是MHC I类相关基因的成员,具有高度的多态性,已发现70多种等位基因型。MICA基因编码的MICA蛋白是NKG2D(NK细胞主要的活化性受体之一)的重要配体.MICA基因在器官移植、肿瘤免疫、病毒感染免疫、自身免疫病等方面发挥重要作用。沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)是常见的感染性致盲及性传播疾病的病原体,具有特殊的发育周期,常造成持续感染,并在多方面影响宿主细胞的生物学行为,但其致病机制尚不完全清楚。本课题组前期研究发现MICA*001和MICA*008可能与Ct的感染免疫机制有关。有研究表明,人成纤维细胞(human fibroblasts,HF)不表达或低表达MICA,并可被Ct感染,且人包皮组织中的成纤维细胞(human foreskin fibroblasts,HFF)较容易分离及进行原代培养。目前,对于MICA是否参与了Ct感染的免疫过程,国内外研究报道较少。目的：(1)分离培养人包皮成纤维细胞(HFF)；(2)Ct感染HFF；(3)在HFF中表达外源性MICA*001和MICA*008基因。方法：(1)采集包皮环切术后的组织,通过组织块贴附法分离培养HFF。在37℃、5％C02条件下,利用含15%FBS的DMEM培养基对HFF进行体外培养,并记录其不同生长过程中的细胞形态；(2)应用免疫细胞化学法对人成纤维细胞标志物波形蛋白进行检测,初步对HFF进行鉴定；(3)对原代培养的HFF进行细菌及支原体的检测；(4)绘制第6代和第12代HFF的生长曲线、分析第8代HFF的染色体数目和结构,以确定所培养HFF的增殖能力及性状的稳定性；(5)Ct与HFF共培养40小时后,进行吉姆萨染色,观察Ct包涵体的形成；(6)用脂质体转染法将逆转录病毒质粒pLXSN.pLXSN-MICA*001和pLXSN-MICA*008转染入PA317包装细胞,收集上清液(分别含有相应的完整病毒)；(7)用含有完整病毒的三种上清液分别感染HFF,48小时后收集HFF总蛋白,western blot检测MICA*001和MICA*008编码的蛋白在HFF中的表达。结果：(1)应用组织块贴附法成功分离出HFF,经鉴定该细胞可以连续传代、增殖能力较强并且性状稳定；(2)吉姆萨染色后HFF内可见Ct包涵体,说明Ct可以感染HFF；(3)应用pLXSN逆转录病毒系统将MICA*001和MICA*008基因导入至HFF中；(4)western blot结果显示：HFF-pLXSN-MICA*001(导入MICA*001的HFF)和HFF-pLXSN-MICA*008(导入MICA*001的HFF)中可检测到MICA蛋白表达。结论：(1)成功分离培养了HFF；(2)Ct可以感染HFF；(3)MICA*001和MICA*008基因分别在HFF中成功表达。