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目的:筛查不同病理类型肺癌细胞株表面PD-L1的表达,为PD-L1作为免疫治疗预测靶点提供基础;通过筛查结果选取不同表达PD-L1水平的肺癌细胞株,一方面通过上、下调其表达水平,进一步探究PD-L1对肺癌细胞株生物学特性的影响。另一方面体外分离、激活、分选CD8+T细胞与不同PD-L1表达水平的肺癌细胞株进行共培养,通过模拟体内免疫微环境,检测肺癌细胞的凋亡率,探究PD-L1表达水平与细胞凋亡水平的差异,进而探究PD-L1表达水平在通过PD-1/PD-L1通路作用的免疫治疗中的作用;并通过siRNA干扰PD-L1的表达模拟PD-L1抗体在阻断PD-1/PD-L1通路在免疫治疗中的作用,为针对PD-1/PD-L1通路的免疫治疗提供理论基础。方法:采用流式细胞术检测不同病理类型肺癌细胞株(HCC827、H1299、A549(腺癌)、H226、H520(鳞癌)、H460(大细胞癌)、H446(小细胞癌))表面经免疫荧光标记的PD-L1分子的表达水平。通过荧光值差分析各肺癌细胞表面PD-L1的表达,进而分别选择高、中、低表达的细胞株,后添加细胞因子IL-4、IL-6、IL-13、TGF-β-1、IFN-γ诱导肺癌细胞株,采用蛋白免疫印迹术(western blotting)筛选出能够上调PD-L1表达水平的细胞因子。并采用siRNA干扰表达技术,western blot筛选出能够有效下调PD-L1表达的siRNA片段。transwell实验术检测细胞在诱导上调和干扰下调后肺癌细胞株的细胞迁移能力变化。采集健康志愿者外周血利用Ficoll淋巴细胞分离液分离外周PBMC,经T细胞体外激活扩增试剂培养激活及保持T细胞体外活性,再经CD8+T细胞磁珠分选CD8+T细胞,与不同表达水平的肺癌细胞株进行共培养,过流式细胞术检测不同细胞株的凋亡水平差异,并分析凋亡率与PD-L1的表达水平的相关性。结果:经流式细胞检测,PD-L1在肺癌细胞株表面的表达水平分别为HCC827、H460(高表达),H1299、H226、H446、H520(中表达),A549(低表达)。在添加细胞因子IL-4、IL-6、IL-13、TGF-β-1、IFN-γ后,TGF-β-1、IFN-γ两种细胞因子具有上调肺癌细胞PD-L1表达的水平。在吉玛公司合成3个siRNA片段经鉴定后,选择具有高效率的干扰片段si-PD-L1能够明显下调中高表达PD-L1的肺癌细胞的PD-L1表达水平。选择具有transwell迁移能力的腺癌细胞株H1299、A549,添加TGF-β-1、IFN-γ两种因子上调肺癌细胞株PD-L1的表达水平后,transwell实验结果显示细胞迁移能力较对照组显著增强。si-PD-L1干扰肺癌细胞株PD-L1表达后,PD-L1的表达水平明显下调,细胞迁移能力较对照组显著减弱;TGF-β-1、IFN-γ诱导细胞株PD-L1表达水平上调后能够引起细胞迁移能力增强,经siRNA干扰后,PD-L1表达水平下调,细胞迁移能力随之显著减弱。利用淋巴细胞分离液分离出外周血PBMC,体外T细胞激活后通过流式细胞术检测,PD-1表达水平上调,经磁珠分选出CD8+T细胞与不同表达水平的肺癌细胞株HCC827、H460(高表达),H446、H226(中表达),A549(低表达))共培养后,流式检测细胞凋亡率显示,肺癌细胞凋亡水平与PD-L1表达呈负相关,经siRNA干扰下调PD-L1表达的肺癌细胞株与CD8+T细胞共培养后凋亡率明显增加。结论:各不同病理类型肺癌细胞株表面有不同程度的PD-L1的表达水平;PD-L1的表达能促进肺癌细胞的迁移,可能参与肺癌转移过程;在免疫治疗中PD-L1表达水平与免疫治疗的效应存在相关性,不同PD-L1表达水平的肺癌细胞株于CD8+T细胞培养,细胞凋亡率不同,下调PD-L1表达通过阻滞PD-1/PD-L1通路增强CD8+T细胞对肺癌细胞的杀伤活性。