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目的:探讨ApoJ基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cells,BMSCs)对大鼠脑出血后TNF-α表达的影响及其可能的作用机制。方法:1、使用“改良二次注血法”构建SD大鼠脑出血模型。2、大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的培养使用全骨髓差速贴壁培养法体外培养。3、脂质体TM 2000介导质粒转染BMSCs,荧光显微镜观察重组质粒pEGFP-N1-apoJ的转染效率,选取转染效率最高的组别后续实验用。4、选择造模成功的144只脑出血大鼠,随机法分3组,分别为:生理盐水对照组(NS组)、骨髓间充质干细胞移植组(BMSCs组)、ApoJ基因修饰的骨髓间充质干细胞移植组(ApoJ/BMSCs组)。每组48只大鼠。5、在造模成功后24小时,三组分别移植等体积生理盐水、BMSCs悬液和转染ApoJ基因的BMSCs悬液到大鼠脑出血部位,分别于1d、3 d、5 d、7 d处死大鼠,按处死时间分4个亚组,每亚组12只大鼠,并在处死前采用改良神经功能评分(modified neurological severity score,mNSS)评估各亚组大鼠的神经功能恢复情况。6、评分后迅速处死各亚组大鼠,采用干湿重法测量脑组织含水量;HE染色镜下观察大鼠脑出血后脑组织的病理改变;免疫组织化学染色对血肿周围TNF–α蛋白的表达进行半定量分析;荧光实时定量PCR对血肿周围TNF-αmRNA定量分析;免疫印迹法对血肿周围脑组织中TNF-α蛋白的表达水平进行测定。结果:1.通过体外培养,不断分离、纯化得到的P3代BMSCs形态一致、增值速度快。2.脂质体介导质粒pEGFP-N1-ApoJ转染BMSCs成功,且转染后能稳定大量表达外源性ApoJ。3.mNSS评分:在移植后的第1d大鼠mNSS评分ApoJ/BMSCs低于同时间点的NS组(P<0.01),ApoJ/BMSCs组与BMSCs组,NS与BMSCs组两两比较无显著差异(P>0.05)。但在其余时间点ApoJ/BMSCs组的mNSS评分均显著低于同时间点BMSCs组和NS组(P均<0.01),且BMSCs组低于同时间点NS组(P均<0.01)。4.脑组织含水量结果显示:各组在移植后的第1d无显著差异(P>0.05),随着移植时间的推移,ApoJ/BMSCs组和BMSCs组的含水量逐渐下降,同时间点比较均显著低于NS对照组(P均<0.01),且同时间点的BMSCs组又低于NS组(P均<0.01)。5.HE染色结果显示:ApoJ/BMSCs组和BMSCs组较相同时间点的NS组病灶周围组织水肿、细胞变性坏死、红细胞聚集、炎细胞浸润均轻,且ApoJ/BMSCs组的受损组织结构比BMSCs组修复更好。6.RT-PCR结果显示:在移植后的各时间点ApoJ/BMSCs组TNF–α的mRNA表达水平明显低于同时间点的BMSCs组和NS组(P均<0.01)),其中BMSCs组又低于同时间点的NS组(P<0.01)。7.免疫组化结果显示:在移植后的各时间点,ApoJ/BMSCs组、BMSCs组和NS组比较,TNF–α的蛋白表达水平显著降低(P均<0.01),其中,在移植后3d、7d,ApoJ/BMSCs组又显著低于BMSCs组(P均<0.01)。8.Western blot结果显示,在移植后各时间点,与NS对照组相比,ApoJ/BMSCs组和BMSCs组的TNF–α蛋白表达都显著降低(P均<0.01),其中ApoJ/BMSCs组又低于同时间点BMSCs组(P均<0.01)。结论:1、ApoJ基因修饰的BMSCs移植能够减轻大鼠脑出血后的炎细胞浸润、减少组织水肿,促进神经细胞修复,且比单纯BMSCs移植作用更好。2、ApoJ可能是通过下调炎症因子TNF–α的表达,减轻炎症引起的继发损害来起到对脑出血的神经保护作用。