温敏溶菌酶分子印迹聚合物的制备及性能研究

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蛋白质组学是当今最为重要的研究领域之一,与人类健康和社会发展具有十分密切的关系。对蛋白质的深入研究需要发展从复杂基体样品系统中选择性地分离和识别特定目标蛋白的方法。分子印迹技术(molecular imprinted technology, MIT)因其对目标分析物具有特异性的识别能力,成为当前解决这一问题的理想方法之一。本研究将温敏聚合物与分子印迹技术相结合,以溶菌酶Lys为模板分子,采用简单的整体印迹法,制备了三种类型的温敏型Lys分子印迹聚合物,并对其结构和性能进行了研究。以NIPAAm为功能单体,采用自由基聚合的方法制备了Lys分子印迹/非印迹PNIPAAm水凝胶。研究结果表明,Lys印迹PNIPAAm水凝胶在Tris-Hcl缓冲溶液中仍具有温敏性,模板分子对印迹和非印迹凝胶的温敏性没有产生影响。印迹与非印迹凝胶对Lys均具有一定的吸附能力,但印迹凝胶的吸附量大于非印迹凝胶。低温下(T<LCST),印迹凝胶的吸附性好于非印迹凝胶,可实现温度对Lys印迹分子选择性识别过程的智能化调控。进而,以SA为主要功能单体,制备了Lys分子印迹/非印迹凝胶膜。研究结果表明,印迹与非印PNIPAAm/CA凝胶膜对Lys均具有一定的吸附能力,但印迹凝胶膜的吸附量大于非印迹凝胶膜,印迹凝胶膜对Lys产生特异性吸附作用。SA的加入使得非特异性吸附增强。随着SA凝胶膜膜厚度的减小,膜对蛋白质的吸附量增加。随着交联剂浓度的增加,凝胶膜对Lys的吸附量逐渐降低。在此基础上,改进制备方法,以NIPAAm为功能单体,加入SA进行互穿改性,制备了Lys分子印迹/非印迹PNIPAAm/CA互穿网络水凝胶。研究结果表明,PNIPAAm/CA印迹/非印迹互穿网络水凝胶具有温敏性,SA的引入使凝胶的力学性能明显增强。Lys印迹互穿网络水凝胶对Lys具有特异吸附性,且可以通过调节温度控制互穿印迹水凝胶的Lys选择吸附性。加入适量的SA和交联剂可以使Lys印迹PNIPAAm/CA互穿网络水凝胶具有较好的Lys选择吸附性能。另外,荧光碳点可应用于Lys印迹PNIPAAm/SA互穿网络水凝胶的Lys特异性吸附检测。
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