目的:党参是一种常用的补益药,具有补中益气、健脾益肺等功效,多以饮片形式应用于组方调剂与中医临床治疗中。中药饮片划分规格等级是便于市场交易的一种重要手段,而目前市场中党参饮片等级划分标准不统一,导致市场流通混乱、党参饮片质量参差不齐。本文通过对党参饮片进行等级研究,建立党参饮片商品等级标准;通过不同等级党参饮片的质量对比研究,制订党参饮片的等级质量标准;通过对党参生品与炮制品中多种有效成分含量测定,研究炮制对党参有效成分含量的影响。方法:1.通过查阅2015年版《中国药典》及国家和各地方炮制规范,确定研究对象党参饮片包括党参片及米炒党参;查阅《76种药材商品规格标准》、《200种中药材商品电子交易规格等级标准》、《中药商品学》及相关书籍,考察党参饮片主产区山西、甘肃等地,以及河北安国、安徽亳州、哈尔滨三颗树等中药材及饮片市场,对党参饮片产区分布、等级划分情况进行调查,并收集不同产地、不同等级的党参饮片作为实验样品。在党参饮片外观性状研究部分,对样品的直径、厚度、质量、杂质含量等性状可量化指标进行测定,并采用变异性分析、相关性分析及单因素方差分析等多种统计学方法,分析出党参饮片商品等级与外观性状指标之间是否具有相关性,并筛选出党参饮片等级划分的外观性状指标,建立党参饮片商品等级标准。2.参照2015年版《中国药典》,对收集的党参饮片(党参片及米炒党参)进行了显微鉴别及薄层鉴别;参照2015年版《中国药典》(一部)附录和第四部通则规定方法,对党参饮片进行常规检查(包括水分、总灰分和醇溶性浸出物),并采用相关性分析、单因素方差分析对不同等级党参片的水分、灰分、浸出物进行对比研究,比较不同产地党参饮片、党参片与米炒党参水分、总灰分、浸出物之间的差异性,并分别拟订党参片、米炒党参的水分、总灰分、浸出物的限度。在本课题组前期研究基础上,采用紫外-可见分光光度法,于490 nm条件下下,测定党参饮片的党参多糖含量;并采用相关性分析、单因素方差分析对不同等级党参片、党参片与米炒党参的党参多糖含量进行对比研究,分别拟订党参片、米炒党参的多糖含量限度。在本课题组前期研究基础上,采用HPLC法进行党参饮片(党参片及米炒党参)特征图谱研究,并进行方法学考察,包括稳定性、精密度、重复性;分别建立党参片及米炒党参对照特征图谱,并进行特征峰指认;比较不同等级、不同产地、不同炮制品党参饮片HPLC特征图谱,建立党参饮片质量标准。3.通过党参饮片HPLC特征图谱研究及文献研究,选择党参中含量或相对峰面积变化与产地、等级、炮制相关的有效成分(紫丁香苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ),建立了多指标同时测定的HPLC含量测定方法;以党参饮片为研究对象,并采用相关性分析、单因素方差分析对测定结果进行统计分析,从化学成分的角度探索米炒炮制对党参中有效成分含量的影响。结果:1.通过文献及市场调研发现,党参饮片等级文献调研结果为:(1)以直径、厚度、是否熏硫为指标划分多个规格和等级:包括党参寸节(4个等级)、党参无硫寸节(4个等级)、党参选片(4个等级)、党参无硫选片(4个等级);(2)以直径划分等级:一等(直径0.8 cm-1.6 cm)、二等(直径0.6 cm-1.4 cm)、三等(直径0.4 cm-1.2 cm),并以厚度划分为党参厚片或党参短段,或以不同毫米孔眼的筛子筛分;市场调研结果是:党参片以直径为划分依据,划分为:精选(直径0.8 cm以上)、大选(0.6 cm-0.8 cm)、中选(0.4 cm-0.6 cm)、小选(0.3 cm-0.4cm)及统货(不经过筛选);米炒党参多为统货。本课题组共收集98批(党参片67批、米炒党参31批)不同等级、不同产地党参饮片样品。本实验参考《200种中药材商品电子交易规格等级标准》、各地方中药炮制规范及相关文献,并结合市场实际现状,选取直径、厚度2个可量化性状指标(观察每批样品无霉变、泛油情况),通过变异性分析、相关性分析、单因素方差分析、柱状图、及统计描述等统计学分析方法,确定党参饮片直径、厚度可作为其等级划分的外观性状指标;并按照均值计算,党参饮片商品等级标准拟订为:党参片或段:党参厚片:厚度2-4 mm;党参短段:厚度5-10 mm一级(大选):直径0.6 cm以上,无虫蛀、霉变;二级(中选):直径0.4 cm以上,无虫蛀、霉变;三级(小选):直径0.3 cm以上,无虫蛀、霉变;统货:直径大小均有,无虫蛀、霉变。米炒党参:米炒党参厚片:厚度2-4 mm,无虫蛀、霉变;米炒党参短段:厚度5-10 mm,无虫蛀、霉变。2.本课题组所收集党参饮片(党参片或段、米炒党参)基原均为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.。党参片或段以及米炒党参横切面:木栓细胞数列至十数列,外侧有单个或成群的石细胞。栓内层窄,细胞略呈长梭形。韧皮部宽广,乳汁管群常与筛管群相伴径向排列,外侧常与周围环绕的薄壁细胞形成团状分布,约占韧皮部的1/2;乳汁管内充满黄色颗粒状物。形成层明显,成环。木质部导管呈放射状排列,约占根的1/3~2/3。薄壁细胞含菊糖,呈扇形、类圆形或不规则形,表面可见放射状纹理,淀粉粒。党参片或段以及米炒党参均以菊糖、石细胞、乳汁管、木栓细胞、梯形或网纹导管等为粉末鉴别的主要特征。薄层鉴别以党参炔苷为对照品,在硅胶G薄层板上以正丁醇–冰醋酸–水(7:1:0.5)为展开剂,以10%硫酸乙醇溶液为显色剂,在90℃条件下加热至显色清晰,分别置于日光和紫外光灯(365 nm)下检视。建立了党参饮片质量标准的显微鉴别项及薄层鉴别项。按照2015年版《中国药典》四部通则规定方法测定党参饮片(67批党参片或段、31批米炒党参)的水分、总灰分、醇溶性浸出物;基于课题组前期研究,对党参饮片的党参多糖含量进行测定。党参片或段水分为8.56%~15.81%,总灰分2.65%~5.81%,醇溶性浸出物63.08%~80.40%,多糖含量10.02%~25.78%;米炒党参水分5.05%~12.40%,总灰分2.75%~5.61%,醇溶性浸出物51.30%~75.38%,多糖含量4.47%~30.13%。且按照均值±20%,及样品合格率在80%以上原则,提出了党参片或段质量标准中水分不得过13.0%,总灰分不得过5.0%,浸出物含量不得少于55.0%,多糖含量不得少于12.0%;米炒党参质量标准中水分不得过10.0%,总灰分不得过5.0%,浸出物含量不得少于55.0%,多糖含量不得少于12.0%。建立了党参饮片质量标准的检查项与含量测定项。建立党参饮片HPLC特征图谱,以5号峰(党参炔苷)为参照峰,分别确定7个特征峰的相对保留时间为:0.26(1号峰)、0.39(2号峰)、0.51(3号峰)、0.66(4号峰)、1.00(5号峰)、1.02(6号峰)、1.30(7号峰);并通过对照品加入法,对党参饮片特征图谱中的特征峰进行指认,共指认出5个特征峰:1号峰为codonopyrrolidium B,3号峰为京尼平苷,4号峰为党参苷I,5号峰为党参炔苷,7号峰为苍术内酯III。党参片(或段)等级间比较,大选与统货的1号峰相对峰面积之间有显著性差异,大选与小选的3号峰相对峰面积有显著性差异;党参片(或段)产地间比较不同产地的1号、2号、3号、7号峰相对峰面积具有一定差异;米炒党参产地间比较,贵州(引种潞党参)米炒党参的1号、2号、6号、7号峰的相对峰面积与山西、甘肃均有显著性差异,山西与甘肃无显著性差异;党参片(或段)和米炒党参比较,1号、6号峰相对峰面积具有著性差异。建立党参饮片商品等级标准,并已提交。3.建立HPLC法同时测定紫丁香苷、党参苷I、党参炔苷、苍术内酯III,方法学考察结果:紫丁香苷在0.25μg/mL~6.67μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=119120X-10886(r=0.9995,n=6),平均加样回收率为98.55%;党参苷I在20.00μg/mL~400.00μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=20288X-98945(r=0.9998,n=6),平均加样回收率为102.56%;党参炔苷在15.00μg/mL~300.00μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=24690X+249436(r=0.9996,n=6),平均加样回收率为101.81%;苍术内酯III在0.39μg/mL~23.50μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,回归方程为Y=44256X-10755(r=0.9998,n=6),平均加样回收率为97.32%。7批党参片或段测定结果:紫丁香苷含量0.0112 mg/g~0.0222 mg/g,党参苷I含量0.4887 mg/g~1.1379 mg/g,党参炔苷含量0.2281 mg/g~0.4304 mg/g,苍术内酯III含量0.0257 mg/g~0.0877 mg/g;7批米炒党参测定结果:紫丁香苷含量0.0149 mg/g~0.0350 mg/g,党参苷I含量0.4825 mg/g~1.13743 mg/g,党参炔苷含量0.2262 mg/g~0.5177 mg/g,苍术内酯III含量0.0222 mg/g~0.1072mg/g。测定结果表明:党参米炒后紫丁香苷、党参苷I、党参炔苷含量有所升高,而苍术内酯III含量有所降低。结论:1.通过文献研究、产地调研及实验数据结果分析,参考《200种中药材商品电子交易规格等级标准》及各地方炮制规范及标准,并结合市场情况,通过SPSS统计分析,筛选党参饮片的直径、厚度作为等级划分的外观性状指标,初步建立了党参饮片商品等级标准。本研究制订的商品等级标准紧密结合党参饮片市场实际,具有一定的实用性、科学性,对当下市场中党参饮片等级评价有一定的指导意义。2.对收集的98批党参饮片(67批党参片或段、31批米炒党参)进行显微鉴别、薄层鉴别、常规检查(水分、总灰分、浸出物)、多糖含量测定及特征图谱研究;并通过SPSS统计分析,以各研究项目为指标,建立党参饮片质量标准。此标准在2015年版《中国药典》的基础上增加了党参多糖含量测定项以及HPLC特征图谱项,从而对党参饮片进行更加科学、综合、全面的质量控制。3.建立并采用HPLC法对14批党参饮片中的有效成分(紫丁香苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷、苍术内酯Ⅲ)进行含量测定,该方法具有良好的准确性、专属性和可行性;测定及比较研究结果为评价党参饮片的质量及探索米炒炮制对党参中有效成分含量的影响提供理论基础。