根癌农杆菌介导的菊花遗传转化体系的建立及ipt基因的导入

来源 :西南农业大学 | 被引量 : 15次 | 上传用户:zahay
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
菊花是我国的传统花卉,也是世界四大鲜切花之一,占切花总量的23%。由于菊花的传统育种方式是利用芽变(菊花雌雄性性器官退化)的方法来选育新品种,所以育种的速度慢,周期长,定向性差。利用基因工程技术,有目的地向菊花中导入一些基因,培育抗病性好、色香形独特、观赏价值高的菊花新品种,不但可以有目的地改良特定性状,还可以缩短育种年限和加快育种进程。本研究通过再生试验选择了两个品种(山城之光和日本小黄)来作为遗传转化的材料,山城之光为切花菊,日本小黄为小菊。所选用的外源基因为抑制叶片衰老的SAG-IPT基因,以期得到耐贮运、瓶插寿命长的切花菊山城之光和抗衰老、花期长的绿化小菊日本小黄。 1.建立了以幼叶和茎段为外植体的再生体系。 取植株刚展开的幼叶或幼茎,消毒后接入MS1(MS0+1.0mg/L2,4-D+0.1mg/L6-BA)中预培养2~6天后,转入MS2(MS0+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LNAA)(幼叶)、MS3(MS0+3.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA)(茎段)后可直接再生出芽。其中,山城之光和日本小黄的幼叶经预培养后再生率可达100%,而白雪、光辉、冬青、白绣纺四个品种的再生率则较低,难以满足遗传转化的需要。日本小黄茎段再生率也达92%,山城之光再生率不足70%,其他品种的茎段再生率则极低。再生出的芽在1/2MS培养基上经7~10天可生根,生根率达100%。 2.建立了以幼叶为受体的遗传转化体系 取切花菊“山城之光”和小菊“日本小黄”的无菌苗叶片,切成4mm~2大小,以OD~600=0.5的农杆菌液感染30min,滤除菌液,接入MS1培养基上,于暗处共培养3天。共培养后,以附加有500mg/L的Cef和500mg/L的Carb的MS0液体培养基震荡脱菌培养2小时,无菌水冲洗5次,无菌滤纸吸干水分。然后接入MS2+50mg/L Cef的培养基上延迟筛选培养3天,再转入MS2+50mg/L Cef+5mg/LKm培养基上进行筛选分化培养。30天后可分化出绿芽,把分化出的绿芽在1/2MS0+10mg/L Km培养基上进行生根筛选,把能够正常生根的苗移栽田间,做进一步的鉴定。 3.通过PCR扩增表明,转基因植株中可以检测出有目的基因(ipt基因)的存在,目的基因已成功地插入菊花的基因组中。园艺性状观察表明,转基因植株和野生株存在有一定的差异。
其他文献
目的:探讨HER-2阳性乳腺干细胞与乳腺癌耐药的关系,为乳腺癌患者的临床个体化治疗和疾病预后提供实验依据。方法:将HER-2弱阳性的乳腺癌细胞(MDA-MB-468)分为未处理组和紫杉醇处理组,采用低浓度加量持续诱导法获得紫杉醇耐药的乳腺癌细胞(MDA-MB-468/Taxol),MTT方法测定两组细胞的存活率,流式细胞仪检测两组细胞之间的HER-2表达,采用微球体培养法富集乳腺癌微球体,逆转录聚
失地农户收入结构转型问题是关系农户生计和社会稳定的迫切问题.利用九江和襄阳621个失地农户两阶段调查数据,考察失地前后农户收入结构的变动情况,并进一步分析失地前后不同
构建高校美术民族化教学体系需要大量的积累和尝试,对中国狮子雕塑艺术图式进行模拟和创新可以从一个侧面人手,为这项工作做一份有特色的理论探索。
某工程为保证达到排水需求并满足景观要求,在地下室顶板处将部分区域的砖砌体排水沟做法改进为采用波纹管通长布置的新型景观式排水沟,从而将景观设计与排水沟设计、施工相结
目的:探讨程序性死亡受体1(programmed death 1,PD-1)及其配体(programmed death-ligand 1,PD-L1)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达情况,及其表达量的相关性,
目的:以新疆医科大学第一附属医院肝移植中心中国公民逝世后器官捐献(China Donation after Citizen’s Death CDCD)肝移植患者为研究对象,收集其临床数据资料,对我中心肝移
目的:观察青海地区年轻女性乳腺癌及中老年女性乳腺癌患者中BRCA1蛋白的表达情况,并探究其与青海地区年轻女性乳腺癌各临床病理特征及预后的关系。方法:收集2014年1月至2018年5月在青海大学附属医院行乳腺癌根治手术切除标本,术后经病理诊断为乳腺癌的女性患者(年龄≤35岁)40例,并收集同期接受乳腺癌根治手术切除标本,术后经病理诊断为乳腺癌的中老年患者(年龄45-70岁)40例作为对照组。详细记录
针对义乌世贸中心工程类梭形建筑幕墙及花瓣形塔冠幕墙的特殊建筑造型给幕墙安装施工带来的难点,通过前期对幕墙工程的优化设计,采用矩形板块代替梯形板块、平板玻璃代替弧形
颁奖嘉宾:格莱美年度最佳专辑获奖者是……“南方小鸡”。记者:“南方小鸡”赢得了五个格莱美提名的全部奖项,包括年度最佳专辑、年度最佳唱片、年度最佳单曲以及其它两个奖
期刊
社会建设落后于经济建设给社会的良性运行和协调发展带来了危机,农村社会建设作为中国发展中的最短板,它已经成为影响当前经济社会发展不稳定的重要因素。如何通过推进农村社会