包载茶多酚的可降解聚合物纳米微球的制备及其对人脂肪干细胞性能的影响研究

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人脂肪干细胞(hASCs)是一种从人脂肪组织中分离出来的干细胞。与其他成体干细胞一样具备自我更新能力与多向分化潜能,是一种非常理想的组织工程的种子细胞,因此对其体外增殖的研究具有重要的意义。本文将茶多酚加入培养基培养hASCs,通过细胞活性检测对用不同浓度(0μg/mL-50μg/mL,梯度为10μg/mL)的茶多酚培养基培养的hASCs的体外增殖进行分析,并且利用DAPI对hASCs细胞核染色,筛选出最佳浓度的茶多酚培养基即10μg/mL。用含10μg/mL茶多酚的培养基培养hASCs,通过荧光显微镜及酶标仪对hASCs进行观测并且绘制细胞生长曲线;用免疫荧光法检测茶多酚长期培养的hASCs的多能性转录因子Sox2的表达情况;通过流式细胞仪对含茶多酚的培养基长期培养的hASCs的6种表面抗原进行分析;然后进行诱导分化实验,对用含茶多酚的培养基长期培养的hASCs进行成骨和成软骨诱导;最后对用含茶多酚的培养基长期培养的hASCs进行长期传代。结果表明10μg/mL茶多酚培养基对hASCs的体外增殖起到促进作用,对hASCs向成骨细胞的分化有促进作用,并且对hASCs的多能性没有影响。并且含10μg/mL茶多酚的培养基用于干细胞体外长期培养时具有延缓hASCs的老化的潜力。由于茶多酚在胃肠系统内不易被有效吸收,易与蛋白结合。因此,制备了一种具有良好生物相容性的p H响应性纳米水凝胶来解决茶多酚的生物利用率低的问题。以聚乙二醇(Mw1000)为引发剂,引发ε-己内酯和L-丙交酯开环聚合,制备聚(己内酯-co-丙交酯)-PEG共聚物二醇(PCLA),再用甲基丙烯酸酐封端得到PCLA预聚物单体(PCLAMA)。用FTIR,1H-NMR,GPC等对合成产物的组成和结构进行了表征。以PCLAMA为大分子交联剂,N-乙烯基吡咯烷酮、丙烯酸为共聚单体,紫外引发聚合制备水凝胶纳米球,并对其溶胀、降解、药物释放、细胞毒性等进行了分析。结果表明水凝胶纳米球的溶胀率随着pH的增加而变大,其中一种水凝胶纳米球包载茶多酚的载药量超过57%,释放132 h的累计释放率达到30%,与人脂肪干细胞共培养48 h后细胞存活率高于94%,并且成功进入细胞,因此PCLAMA-AP具有将茶多酚直接递送入细胞后进行缓释的潜力,有可能极大的提高茶多酚的生物利用效率。
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