【摘 要】
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人脂肪干细胞(hASCs)是一种从人脂肪组织中分离出来的干细胞。与其他成体干细胞一样具备自我更新能力与多向分化潜能,是一种非常理想的组织工程的种子细胞,因此对其体外增殖的研究具有重要的意义。本文将茶多酚加入培养基培养hASCs,通过细胞活性检测对用不同浓度(0μg/mL-50μg/mL,梯度为10μg/mL)的茶多酚培养基培养的hASCs的体外增殖进行分析,并且利用DAPI对hASCs细胞核染色,
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人脂肪干细胞(hASCs)是一种从人脂肪组织中分离出来的干细胞。与其他成体干细胞一样具备自我更新能力与多向分化潜能,是一种非常理想的组织工程的种子细胞,因此对其体外增殖的研究具有重要的意义。本文将茶多酚加入培养基培养hASCs,通过细胞活性检测对用不同浓度(0μg/mL-50μg/mL,梯度为10μg/mL)的茶多酚培养基培养的hASCs的体外增殖进行分析,并且利用DAPI对hASCs细胞核染色,筛选出最佳浓度的茶多酚培养基即10μg/mL。用含10μg/mL茶多酚的培养基培养hASCs,通过荧光显微镜及酶标仪对hASCs进行观测并且绘制细胞生长曲线;用免疫荧光法检测茶多酚长期培养的hASCs的多能性转录因子Sox2的表达情况;通过流式细胞仪对含茶多酚的培养基长期培养的hASCs的6种表面抗原进行分析;然后进行诱导分化实验,对用含茶多酚的培养基长期培养的hASCs进行成骨和成软骨诱导;最后对用含茶多酚的培养基长期培养的hASCs进行长期传代。结果表明10μg/mL茶多酚培养基对hASCs的体外增殖起到促进作用,对hASCs向成骨细胞的分化有促进作用,并且对hASCs的多能性没有影响。并且含10μg/mL茶多酚的培养基用于干细胞体外长期培养时具有延缓hASCs的老化的潜力。由于茶多酚在胃肠系统内不易被有效吸收,易与蛋白结合。因此,制备了一种具有良好生物相容性的p H响应性纳米水凝胶来解决茶多酚的生物利用率低的问题。以聚乙二醇(Mw1000)为引发剂,引发ε-己内酯和L-丙交酯开环聚合,制备聚(己内酯-co-丙交酯)-PEG共聚物二醇(PCLA),再用甲基丙烯酸酐封端得到PCLA预聚物单体(PCLAMA)。用FTIR,1H-NMR,GPC等对合成产物的组成和结构进行了表征。以PCLAMA为大分子交联剂,N-乙烯基吡咯烷酮、丙烯酸为共聚单体,紫外引发聚合制备水凝胶纳米球,并对其溶胀、降解、药物释放、细胞毒性等进行了分析。结果表明水凝胶纳米球的溶胀率随着pH的增加而变大,其中一种水凝胶纳米球包载茶多酚的载药量超过57%,释放132 h的累计释放率达到30%,与人脂肪干细胞共培养48 h后细胞存活率高于94%,并且成功进入细胞,因此PCLAMA-AP具有将茶多酚直接递送入细胞后进行缓释的潜力,有可能极大的提高茶多酚的生物利用效率。
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