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目的:课题从“损伤血瘀证”大鼠血清TNF系统变化入手,观察“损伤血瘀证”骨骼肌细胞凋亡情况,分析整个凋亡变化过程的始动因素,在与凋亡密切相关的TNF系统中寻找这种始动因素的具体机制,从而判断凋亡对于损伤血瘀证进展及修复的影响;观察“损伤血瘀证”骨骼肌细胞的凋亡的详细时间规律和凋亡相关TNF家族与时间演进的相关性。方法:1.造模方法:用“定量化重力击打法”。2.分组:80只试验大鼠分为8组。正常组,1H模型组,12H模型组,1D模型组,3D模型组,5D模型组,7D模型组,14D模型组。3.指标:分别观察未损伤大鼠、损伤1小时,损伤12小时,损伤1天,损伤3天,损伤5天,损伤7天,损伤14天骨骼肌细胞凋亡情况;TNF家族相关指标TNFα、FAS、sTRAIL、RANK、RANKL变化情况。结果:1骨骼肌凋亡情况:通过与空白组比较,造模后1小时,12小时均未发生显著变化,24小时后凋亡出现明显上升趋势,第3天达到一个高点,3-5天期间相对平稳,第7天出现显著异常向上波动情况,第14天凋亡水平略有下降,但仍然处于高位。2 TNF家族变化情况:(1) TNFα变化情况:损伤后1H,立刻出现了TNFα的变化,继而在12H依然处于显著性变化的高位,24H点稳定,24H后,血清TNFα的水平逐步趋于正常。(2) sTRAIL变化情况:空白组与其他各组比较没有发生显著性变化,指标的波动范围较小。造模1H组与7天和14天比较,存在显著性差异。(3)FAS变化情况:损伤后1H,立刻出现了FAS的变化,继而在12H依然处于显著性变化的高位,24H恢复到正常水平。损伤24H以内的两个时间点1H和12H与最后一组14天之间存在量差。(4) RANKL变化情况:损伤后1H,立刻出现了RANKL的变化,继而在12H恢复,24H时再次增加,随后的时间点逐步逐步下降,7-14天比正常值的水平还低。(5) RANK变化情况:实验表明,各组与空白组之间均无显著性差异(P>0.05),7天组,与损伤的1H和12H比较,有显著差异性(P<0.05)。结论:(1)“损伤血瘀证”的破坏和修复的核心是凋亡造成的,凋亡分三个阶段,两个激活点。凋亡分三个阶段分别是:0-24小时为凋亡前期;1-7天为凋亡暂时稳定期;7天以后为凋亡持续期。两个激活点是:第1天为凋亡暴发点;第7天为凋亡转折点。(2)“损伤血瘀证”骨骼肌细胞“凋亡前期”凋亡水平未发生显著异常提示伤科早期用活血化瘀治疗似有不妥。(3)“损伤血瘀证”骨骼肌细胞凋亡过程中的两个时间段、一个时间点与时间医学的周节律相符。(4)“损伤血瘀证”凋亡加速和修复核心在于TNF家族的变化,TNF通路、FAS通路是损伤血瘀证细胞凋亡前奏通路,RANKL通路是损伤血瘀证细胞凋亡的核心,是组织破坏和修复的核心指标。(5)骨骼肌凋亡情况证明传统伤科内治法“三期辨证”可能不够精准,有待进一步研究改进。