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背景与目的埃兹蛋白(Ezrin)是细胞骨架桥接蛋白ERM(Ezrin-Radixin-Moesin)家族成员之一,主要分布于细胞皮层。Ezrin作为膜蛋白和肌动蛋白连接蛋白,通过ERM家族特征性FERM(four-point-one protein,ezrin,redixin,moesin)功能域将胞膜蛋白与肌动蛋白连接,参与多种信号传导,在调控细胞的形态、生长、生存、黏附、增殖和迁徙等生物学功能中发挥重要作用。研究发现,用特异性Ezrin小干扰RNA作用于肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)刺激的人肺微血管内皮细胞(Human pulmonary microvascular endothelial cell,HPMVEC),磷酸化的Ezrin减少,可显著抑制内皮细胞通透性的增加。但在肺炎症损伤过程中,Ezrin具体通过哪些信号传导通路参与其中,尚未见报道。本研究通过TNF-α建立大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cell,RPMVEC)损伤模型,探讨RPMVEC炎性损伤与Ezrin表达量及磷酸化之间的关系,以及Ezrin在急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)发病机制中的作用和小G蛋白家族成员Rac1对Ezrin在TNF-α致RPMVEC炎性损伤中的影响。方法1)体外肺组织块贴壁法分离培养原代RPMVECs;2)蛋白质免疫印迹技术(Western-blotting technique)检测TNF-α刺激RPMVECs后各时间点Ezrin及其磷酸化的表达水平。3)蛋白质免疫印迹技术测定NSC23766刺激RPMVECs后不同时间点Ezrin及p-Ezrin的表达;结果1)体外成功分离培养出原代RPMVECs,经光镜下的细胞形态学及植物凝集素结合实验鉴定。2)RPMVECs中仅低量表达Ezrin,且TNF-α刺激对Ezrin无明显影响。10μg/L TNF-α刺激RPMVECs不同时间(0h、0.25h、0.5h、1h、3h、6h、12h、24h)后发现:Ezrin表达无变化。而TNF-α可呈时间依赖性增加Ezrin磷酸化,相对表达量分别为(0.21±0.33)、(0.53±0.19)、(0.95±0.24)、(1.07±0.30)、(1.68±0.30)、(1.32±0.37)、(0.93±0.20)、(0.87±0.18),0.25 h(0.53±0.19)时开始高于0 h(0.21±0.33),3h(1.68±0.30)达峰值且显著高于0 h、0.25 h、0.5 h、1 h、6 h、12 h、24 h(均P<0.001),24 h(0.87±0.18)仍高于0 h。各组间比较差异有统计学意义(F=62.2,P<0.001)。3)与空白对照组(0.68±0.16)比较,单独使用10μg/L TNF-α(0.92±0.12)或200μmol/L NSC 23766(1.33±0.24)刺激均能诱导p-Ezrin表达量增加(t=-2.864、P=0.020,t=-5.429、P=0.000);将NSC 23766与TNF-α共同刺激(2.14±0.18)能明显提高p-Ezrin表达量,与TNF-α(0.92±0.12)单独刺激组比较有统计学差异(t=-14.670,P<0.001)。结论1)RPMVECs仅低量表达Ezrin,TNF-α刺激对Ezrin无明显影响。2)TNF-α以时间依赖的方式上调PMVEC中磷酸化Ezrin的表达。3)抑制Rac1信号通路可通过上调Ezrin磷酸化表达参与TNF-α对RPMVECs的致伤效应。