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目的:通过观察研究加味四逆散对酒精性肝纤维化大鼠肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的表达及肝组织病理学的影响,探讨其治疗酒精性肝纤维化的作用机制,为进一步深入研究打下基础,为临床应用及进一步研发提供一定的理论依据。 方法:SPF级雄性Wistar大鼠90只,体重200±20g,适应性喂养三天后随机抽取10只,设正常对照组。剩余大鼠采用“酒精-橄榄油-吡唑”混悬液灌胃并间断饲高脂饲料,结合微量CCL4腹腔注射的复合模式制备酒精性肝纤维化模型。造模成功后,随机分为病理模型组、鳖甲煎丸治疗组、加味四逆散低、中、高剂量治疗组。正常对照组和病理模型组给予等量的生理盐水灌胃,各治疗组给予相应剂量的药物进行灌胃治疗,共治疗4周。治疗结束后,处死各组大鼠,采取血清和肝组织。采用自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平;采用酶联免疫吸附测定法检测肝组织TNF-a的表达;采用苏木精—伊红染色法(HE)染色法,在光学显微镜下观察并分析各组大鼠肝组织病理学变化。 结果:1.加味四逆散对酒精性肝纤维化大鼠血清中ALT、AST含量的影响:与正常对照组对比,模型组ALT、AST有明显升高趋势,具有极显著性差异(P≤0.01);与模型组对比,各治疗组ALT、AST有明显降低趋势,具有显著性差异(P≤0.01,P≤0.05);与鳖甲煎丸组比较,加味四逆散高、中剂量组AST、ALT含量均呈下降趋势,有显著性差异(P≤0.05,P≤0.01);与加味四逆散低剂量组比较,加味四逆散高、中剂量组ALT、AST含量具有显著性差异(P≤0.05),鳖甲煎丸组无显著差异(P>0.05)。2.加味四逆散对酒精性肝纤维化大鼠肝组织中TNF-a表达的影响:与正常对照组对比,模型组TNF-a有明显升高趋势,具有极显著性差异(P≤0.01);与病理模型组对比,各治疗组 TNF-a有明显降低趋势,具有显著性差异(P≤0.01,P≤0.05);与鳖甲煎丸组比较,加味四逆散中剂量组TNF-a表达均呈下降趋势,有显著性差异(P≤0.05),加味四逆散高、中剂量组无显著差异(P>0.05);加味四逆散各剂量组之间进行比较,无显著性差异(P>0.05)。3.加味四逆散对酒精性肝纤维化大鼠肝组织病理学变化的影响观察病理模型组可见肝小叶结构被破坏,肝细胞广泛的脂肪变性、纤维组织增生,个别动物可见假小叶形成。与模型组比较,各治疗组肝组织损伤可见有不同程度的修复,纤维化程度明显减轻。各治疗组与模型组对比均有疗效,以加味四逆散中剂量治疗组疗效更为明显。 结论:1.加味四逆散可改善酒精性肝纤维化大鼠肝功能及肝脏组织病理学变化,具有一定的治疗肝纤维化的作用。2.加味四逆散可降低酒精性肝纤维化大鼠肝组织中TNF-a的表达,其治疗酒精性肝纤维化的作用机理与抑制TNF-a的表达有一定关系。3.加味四逆散对实验性大鼠酒精性肝纤维化有一定治疗效果,且疗效优于鳖甲煎丸。4.加味四逆散中剂量对酒精性肝纤维化的治疗效果最好。