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氟苯尼考(FF)是一种新型的酰胺醇类抗生素,具有抗菌谱广,无潜在再生障碍性贫血作用等优点,被广泛应用于兽医畜牧业。但实际应用中FF水溶性差,生物利用度低,疗效往往不理想。本文采用Top-down技术制备氟苯尼考纳米晶(FF-NC),以期提高其水溶性及生物利用度,考察其吸收情况及体内外相关性。文章主要研究内容及结果如下:(1)制剂处方前研究建立制剂中FF的含量测定方法,并进行方法学验证;对FF性质进行考察,包括比旋度,油水分配系数,溶解度及溶出速率等;同时考察了强光、高湿、高温对FF稳定性的影响。结果表明,文中所建立的含量测定方法重现性及稳定性良好,辅料对测定无干扰,符合方法学要求;测得原药比旋度为-17.4±1.2°,符合2015年版《中华人民共和国兽药典》“氟苯尼考”项下规定;测得油水分配系数为1.80±0.04;原药在水中溶解度仅为1.159±0.080 mg·m L-1,以水为溶出介质时,一小时累积溶出百分率小于50%;影响因素试验中,光、湿、热对原药稳定性影响较小。(2)FF-NC的制备工艺探索在实验室规模下,采用微型化介质研磨法对稳定剂种类、药量、稳定剂用量等处方因素以及研磨介质用量,温度等工艺因素进行单因素考察,采用Box-Behnken设计-效应面法优化制备处方,将优选出的处方放大化制备并进行喷雾干燥固化;考察复溶后粒径、电位、饱和溶解度、在不同p H介质中体外溶出情况等。考察固化产品的粉体学性质、加速及长期稳定性;采用FTIR、DSC、XRD、SEM等技术对其形态、晶型进行表征。最终确定制备处方为:HPMC E5,SDS于水中溶胀成高分子溶液,在800 rpm分散转速的条件下加入搅拌器,同时加入FF,预混30 min,后在砂磨机中研磨,即得FF-NC悬液,采用喷雾干燥进行固化,固化产品为白色粉体,复溶后呈蓝色乳光;三批产品固化前粒径为265.8±18.5 nm,PDI为0.163±0.023,复溶后粒径为276.4±19.4 nm,PDI为0.166±0.011;休止角及堆密度测定结果表明固化产品的流动性符合生产过程中的要求;加速及长期稳定性考察结果表明固化产品在上述条件下,一小时溶出速率、含量及粒径等均未发生明显变化;SEM结果表明FF-NC呈类球形,分布较均匀;DSC和XRD结果表明FF-NC中纳米粒子的晶型为无定型;在不同p H的介质中,FF-NC的溶解度及溶出速率相较于原药均有显著提升,且溶出受p H的影响较小。(3)FF及FF-NC体外药效考察体外抑菌试验考察FF及FF-NC对大肠杆菌(EC)及金黄色葡萄球菌(AF)的MIC以及MBC,并测定了抑菌圈的大小。体外抗炎试验中采用MTT试验考察了FF及FF-NC对RAW 264.7的细胞毒性,采用Elisa及Gress试剂法考察了FF及FF-NC对炎症因子TNF-α,IL-6及炎症反应介质NO含量的影响。结果表明,FF-NC对EC及AF的MIC分别为原药的77.5%、80.0%,MBC与FF相当,抑菌圈直径约为FF的4倍,市售预混剂的1.3倍;MTT试验结果表明,在20-100μg·m L-1浓度范围内,FF原药及FF-NC对RAW 264.7细胞没有显现出明显的细胞毒性;在相同低剂量浓度的情况下(5μg·m L-1),纳米晶对TNF-α的抑制率比FF高出15.55%,而接近FF组25μg·m L-1用量时的抑制率(29.58%);对于LPS组,FF组低、中、高剂量对IL-6的分泌抑制率分别达15.82%、24.92%、49.93%,相同剂量浓度下的FF-NC组抑制率则分别达到21.27%、35.81%、70.46%,两组对IL-6的抑制作用均呈现剂量依赖,且同等剂量浓度下纳米晶组的抑制作用会更强。NO含量测定结果显示,5μg·m L-1剂量浓度的FF-NC对NO生成的抑制效果相当于100μg·m L-1的FF所产生的效果,且使NO含量回到正常细胞水平。(4)FF及FF-NC在大鼠中小肠吸收情况考察以大鼠作为实验动物,采用在体单向灌流模型考察了FF及FF-NC在小肠的吸收特性,并通过小肠组织切片考察了制剂口服毒性,初步评价制剂安全性。结果显示,FF-NC及FF的主要吸收部位为十二指肠,其次为空肠和回肠;FF-NC在上述各肠段的Ka值分别为FF组的2.28、1.25、10.1倍,Peff值分别为FF组的1.59、1.17以及7.0倍。FF-NC在小肠各部的吸收程度均高于FF,且主要提升了FF在回肠部位的吸收。大鼠小肠组织切片结果表明,FF原药及所制得纳米晶对小肠粘膜组织几乎无损伤,口服毒性小。(5)药动学及体内-体外相关性(IVIVC)研究以FF为对照,通过口服灌胃给药考察FF-NC在大鼠体内药动学行为,并结合前述体外溶出特性结果,采用Wagner-Nelson公式建立制剂体内-体外相关性。结果表明,口服FF及纳米晶的体内药动行为最符合一室模型。与FF组相比,除Tmax外,主要药动学参数(Cmax,T1/2,AUC0-t,MRT,CL,V)存在显着差异;纳米晶组的CL为0.53 L·h-1·kg-1,原药组CL为2.48 L·h-1·kg-1,纳米晶组AUC0-t,Cmax,MRT为38.51mg·h·L-1、9.51μg·m L-1、3.23 h,分别为原药组的4.62、2.06和1.68倍;IVIVC考察结果表明,FF-NC在模拟肠液介质中体外溶出度与体内药物吸收分数相关性良好,因此可以根据体外溶出情况来预测药物在体内的吸收规律。综上所述,本文构建了FF-NC释药系统,提高其水溶性及生物利用度,增强抑菌及抗炎效果,同时建立了在体肠吸收及体内-体外相关性模型,为难溶性药物的开发和应用提供了一定实验参考。