【摘 要】
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目的:本课题的主要目的在于研究长链非编码RNA（long non-coding RNAs,LncRNA）-小核仁RNA宿主基因17（small nucleolar RNA host gene 17,SNHG17）对结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞增殖和转移的影响,并初步探讨其机制。方法:首先通过荧光定量逆转录PCR（quantitative reverse transcr
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目的:本课题的主要目的在于研究长链非编码RNA（long non-coding RNAs,LncRNA）-小核仁RNA宿主基因17（small nucleolar RNA host gene 17,SNHG17）对结直肠癌（colorectal cancer,CRC）细胞增殖和转移的影响,并初步探讨其机制。方法:首先通过荧光定量逆转录PCR（quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR）来检测CRC组织和细胞中SNHG17的表达情况,通过CCK-8和平板克隆实验来检测SNHG17对CRC细胞体外增殖和克隆形成能力的影响;Transwell实验观察SNHG17对CRC细胞迁移和侵袭的影响;通过裸鼠皮下成瘤实验来研究SNHG17对肿瘤体内生长的影响;RNA pull down实验结合蛋白质谱分析寻找SNHG17结合蛋白,并通过western blot和RNA免疫沉淀分别从正反两个方面验证SNHG17和靶蛋白的结合;免疫组化实验进一步验证靶蛋白在CRC组织中的表达;最后通过功能回复实验再次验证SNHG17和靶蛋白之间的相互作用。结果:和癌旁组织相比,SNHG17在CRC组织中的表达水平明显升高（P<0.0001）,并且SNHG17的高表达预示CRC患者不良预后（对数秩=10.57,P=0.0012）。功能实验结果表明,过表达SNHG17显著促进CRC细胞增殖、迁移和侵袭能力;敲降SNHG17表达后,CRC细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;动物实验结果显示,过表达SNHG17能够促进肿瘤体内生长和转移,而敲降SNHG17抑制肿瘤体内生长和转移。机制上,通过RNA pull down实验结合质谱分析,确定SNHG17结合的靶蛋白为pescadillo核糖体生物发生因子1（Pescadillo ribosomal biogenesis factor 1,PES1）,在过表达SNHG17的CRC细胞中,PES1的蛋白水平升高;SNHG17显著延长了HCT116细胞中PES1蛋白的半衰期,而沉默SNHG17会降低CRC细胞中PES1的半衰期;免疫组化结果显示,PES1在CRC组织中高表达,并且与SNHG17的表达呈现正相关（P<0.05）。功能回复实验证明PES1可介导SNHG17对CRC细胞增殖和迁移的促进作用。结论:SNHG17在CRC中发挥促癌作用;SNHG17能够促进CRC细胞的增殖,迁移和侵袭;SNHG17通过和Trim23竞争结合PES1,抑制其泛素化降解,促进CRC的发生发展。
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