论文部分内容阅读
目的研究乳源免疫调节肽（PGPIPN）对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及其相关基因表达的影响。方法体外培养卵巢癌SKOV3细胞，分别使用浓度10-6、10-4、10-2g/L的PGPIPN与之孵育24、48h、72h，利用MTT法检测PGPIPN对其增值的影响，并用人正常肝细胞LO2作为对照，检测其细胞毒性作用；通过流式细胞技术分析PGPIPN对SKOV3细胞周期的影响；利用Hoechst33258染色法检测PGPIPN作用后SKOV3细胞凋亡情况；通过cDNA芯片技术筛选凋亡相关基因；实时荧光定量PCR法检测bax、bcl-xl、caspase-3mRNA水平的表达量；Western blot方法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3蛋白表达量。结果1.MTT结果表明，不同浓度的PGPIPN对SKOV3细胞的增值有明显的抑制作用；2.细胞周期结果表明，与对照组相比，10-2、10-4g/L的PGPIPN作用SKOV3细胞48h和72h后，G0/G1期细胞比例明显减少，S期细胞比例明显增多（P<0.05）；3. Hoechst33258染色结果表明:在10-2、10-4g/L PGPIPN处理48h和72h后，SKOV3细胞明显缩小，细胞核染色质高度凝集，出现高亮荧光；4.cDNA表达谱芯片结果显示：PGPIPN低剂量组与正常对照组的比较中共得到1177个差异基因，其中上调基因791个，下调基因386个；高剂量组与正常对照组的比较中共得到744个差异基因，其中上调基因486个，下调基因258个；5. Real-time PCR结果表明：与对照组相比，bax mRNA水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而升高（P<0.05）；bcl-xl mRNA水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而降低（P<0.01）； caspase-3mRNA水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而升高（P<0.05）；6.Western blot分析结果表明：与对照组相比，Bax蛋白水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而升高（P<0.05）； Bcl-xl蛋白水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而降低（P<0.01）；Caspase-3蛋白水平的表达量随着PGPIPN浓度升高而升高（P<0.05）。结论1. PGPIPN能明显抑制SKOV3细胞的增值，诱导其凋亡，而对正常细胞无细胞毒性作用。2. PGPIPN通过促进细胞中bax的表达及抑制bcl-xl的表达来调控SKOV3细胞的凋亡，该过程可能和caspase的活化相关。