论文部分内容阅读
萝卜硫素（l-异硫氰酸-4-甲磺酰基丁烷,Sulforaphane, l-isothiocyanato-4 -methysulfiny-butane）是葡萄糖莱菔子苷（芥子油苷,即硫代葡萄糖苷的一种）经黑芥子酶酶解或酸水解产生的一类异硫代氰酸盐,是迄今为止蔬菜中发现的抗癌活力最强的活性物质。利用现代植物组培技术直接获得次生代谢产物用于药物生产,具有保护资源、生长周期短、不受地区和季节限制、个体差异小、便于工业化生产等优点。本研究建立了萝卜愈伤组织诱导和培养体系,考察了外源添加物、不同碳源、光照条件及不同收获时间对萝卜愈伤组织生长及其中萝卜硫素生成量的影响。结果表明:1.萝卜愈伤组织诱导和继代的最佳培养基分别为MS+0.1 mg·L-12,4-D+2.0 mg·L-16-BA和MS+3.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA;2.通过响应面实验,萝卜硫素的最佳提取条件为:提取剂:二氯甲烷,液固比:22.9,浸提时间:3.68h,浸提温度:22.4℃,浸提2次;3.苯丙氨酸和缬氨酸对萝卜愈伤组织的增殖有明显促进作用。二者的添加浓度为10 mg·L-1时,增殖倍数分别达11.17和10.28倍,苯丙氨酸同时能显著的促进愈伤组织中萝卜硫素含量和产量,蛋氨酸对萝卜愈伤组织增殖及萝卜硫素含量没有促进作用;4.硝酸银抑制萝卜愈伤组织的增殖但浓度为10 mg·L-1时,萝卜硫素的含量和产量达152.51μg·g-1和41.77μg·flask-1;5.β-环糊精添加浓度为5 mg·L-1和20 mg·L-1时,萝卜愈伤组织的生长量分别是对照的2.5和2.3倍,但是对萝卜硫素含量无促进作用。水杨酸抑制萝卜愈伤组织的增殖,但对萝卜硫素的含量和产量有显著的促进作用;6.萝卜愈伤增殖的最佳糖源为蔗糖,最佳添加浓度为25 g·L-1。麦芽糖在15 g·L-1时萝卜硫素含量最高,而萝卜硫素产量最高的则是35 g·L-1的葡萄糖;7.LED红光能明显提高萝卜细胞中萝卜硫素含量和产量, LED黄光和绿光最不利于萝卜硫素的合成;8.愈伤组织增殖量第30 d达到最大值,其萝卜硫素含量第14 d达到最大值。就萝卜硫素总产量而言,第14d为愈伤的最佳收获期。