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第一部分ASK1调节的VEGF通路在糖尿病视网膜病变发病中的作用目的:阐明凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulation kinase 1,ASK1)调节的血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)通路在高糖刺激下对人视网膜血管内皮细胞(human retina microvascular endothelial cells,HRMECs)的作用及其机制。方法:原代培养HRMECs,分别在低浓度葡萄糖(5mM)、高浓度葡萄糖糖(30mM)、低浓度葡萄糖联合ASK1-shRNA慢病毒、高浓度葡萄糖联合ASK1-shRNA慢病毒、低浓度葡萄糖联合ASK1抑制剂NQDI-1(1OOnM)、高浓度葡萄糖联合NQDI-1(100nM)、低浓度葡萄糖联合NLRP3(NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3)炎症小体抑制剂 MCC950(50nM)、高浓度葡萄糖联合MCC950(50nM)培养基中培养。Western blot法检测以上培养的各组细胞中总 ASK1(Total-ASK1,T-ASK1)\磷酸化 ASK1(phospho-ASK1,p-ASK1)、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶 p38(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK)及总丝裂原活化蛋白激酶p38(Total-p38 MAPK,T-p38MAPK)、VEGF、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和剪切半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)蛋白的表达。运用Real time PCR及Western blot法分别检测以上培养的各组细胞中的NLRP3、p53、白细胞介素1 β(Interleukin-1 beta,IL-1 β)和白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)的mRNA和蛋白表达。应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺 口末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL)和MTT法分别检测细胞的凋亡和细胞的活力。应用GraphPad Prism 5.0软件进行统计分析。结果:高糖孵育后的HRMECs中p-ASK1和p-p38蛋白较对照组表达增加(P<0.05),高糖孵育组的NLRP3的mRNA和蛋白表达都高于低糖孵育组(P<0.05),而ASK1基因沉默或者NQDI-1的干预抑制这些变化(P<0.05);高糖诱导 HRMECs 中 IL-1 β、IL-18、VEGF、p53、Caspase-1 和 Clevaed-Caspase-3等蛋白的表达量较低糖组升高(P<0.05),NLRP3特异性抑制剂MCC950的干预能抑制 IL-1 β、IL-18、VEGF、p53、Caspase-1 和 Clevaed-Caspase-3 等蛋白及P53、IL-1 β和IL-18的mRNA的表达(P<0.05);同低糖组相比,高糖诱导HRMECs凋亡显著增加(P<0.01)和细胞活力降低(P<0.05),ASK1基因沉默或者NQDI-1干预后,高糖诱导HRMECs凋亡减少(P<0.05)和细胞活力增加(P<0.05),并且降低高糖诱导的 IL-1 β、IL-18、VEGF、p53、Caspase-1 和 Clevaed-Caspase-3等蛋白的表达(P<0.05),抑制P53、IL-1 β和IL-18的mRNA的表达。结论:高糖刺激可诱导HRMECs中ASK1/p38MAPK信号通路的活化,NLRP3炎症小体激活,VEGF上调,引起HRMECs中的炎症反应和细胞凋亡;抑制ASK1,可防止高糖诱导的视网膜血管内皮细胞炎症活化和细胞凋亡,ASK1可能是糖尿病视网膜病变临床防治的一个潜在干预新靶点。第二部分抗VEGF药物及改良ETDRS激光治疗糖尿病性黄斑水肿疗效对比分析目的:探讨玻璃体腔注射抗VEGF药物雷珠单抗、康柏西普以及改良ETDRS(early treatment Diabetic Retinopathy Study,ETDRS)激光治疗糖尿病黄斑水肿(Diabetic Macular Edema,DME)的疗效,并进行对比分析。方法:本项研究纳入DME患者为研究对象共24例(24眼),入选患眼1:1:1随机分组为雷珠单抗治疗组,康柏西普治疗组及改良ETDRS激光治疗组,雷珠单抗及康柏西普治疗组均为连续3月给药后按需治疗,改良ETDRS激光治疗组治疗1次后按需治疗,治疗后随访12月,每月观察三组患者治疗前后最佳矫正视力(best corrected visual acuity,BCVA)、黄斑中心凹视网膜厚度(central retinal thickness,CRT)、眼底照相等情况变化。结果:治疗前三组患者的平均年龄、性别、糖尿病病程、空腹血糖、糖化血红蛋白、黄斑水肿类型、BCVA及CRT的差异均无统计学意义(P>0.05):在随访终点共21例21眼DME患者,其中雷珠单抗治疗组6例6眼,康柏西普治疗组7例7眼,改良ETDRS激光治疗组8例8眼。治疗12月后雷珠单抗治疗组及康柏西普治疗组分别较治疗前BCVA提高(9.50±1.75)、(7.29±1.77)个字母,较治疗前CRT降低(220.17±48.95)、(226.29±37.44)um,差异均有统计学意义(P<0.05),;改良ETDRS激光治疗组较治疗前BCVA提高(4.00±2.65)个字母,CRT降低(59.38±43.97)um,差异均无统计学意义(P>0.05);各个随访时间点三组间BCVA的比较差异均无统计学意义(P>0.05),除了治疗后1m,余各个随访时间点三组间的CRT的比较差异均有统计学意义(P<0.05),而在各个随访时间点雷珠单抗治疗组与康柏西普治疗组的BCVA及CRT的差异均无统计学意义,且两组间注射次数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:玻璃体腔注射雷珠单抗或康柏西普在降低DME患者CRT的疗效均优于单独改良ETDRS激光治疗,玻璃体腔注射雷珠单抗或康柏西普均能有效提高DME患者的视力,降低CRT,而玻璃体腔注射雷珠单抗与玻璃体腔注射康柏西普在治疗DME的疗效无显著差异。玻璃体腔注射抗VEGF药物是目前DME的最有效的治疗方法。