持续表达HBsAg细胞靶向清除的载体构建研究和初步应用

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目的:研究丙型肝炎病毒(Hepatitis c virus,HCV)核糖体插入位点(IRES)生物学功能,分析HCV核心蛋白与其的相互作用,构建以HBV S基因为靶向基因的且具有自我调控能力的乙型肝炎病毒基因治疗载体,为后续的建立乙型肝炎及其相关性疾病的非细胞溶解性清除HBV机制提供理想的基因治疗载体.结论:间接免疫荧光证明HCV IRES位点可以启动下游基因翻译.以此为基础,构建了具有自我调控功能的基因治疗携带载体,测序结果表明构建载体序列的正确性;转染2.2.15细胞和HepG<,2>细胞结果表明:不需要其它因子诱导,构建的pcDNA<,3>-SCITK系统能够随着感染细胞内HBsAg的变化,自我调控下游TK基因表达,产生针对2.2.15细胞特异性杀伤作用.pcDNA<,3>-SCITK在一定程度上具有模拟人体基因本身的调控功能和效应基因(TK基因)靶向性.该载体系统构建成功可以为后续的在乙型肝炎患者体内靶向非细胞溶解清除HBV机制或TK基因效应机制形成,建立体内抗感染免疫和彻底清除HBV打下基础.
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