第一部分鸢尾苷元对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用研究目的：肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia and reperfusion injury,HIRI)是肝移植和某些需要阻断肝门血流手术过程中发生的一种病理过程,它可以造成移植物早期失功能,最后影响手术成功。由于供肝短缺,边缘性供肝越来越多地用于临床。由于边缘性供肝对缺血缺氧耐受性差,所以,对于边缘性供肝来说,如何减少缺血再灌注损伤尤为重要。中药由于其副作用少,作用靶点多,是干预肝脏缺血再灌注损伤的研究热点之一。很多中药已经被研究证实具有减轻肝脏缺血再灌注损伤的作用。鸢尾苷元是一种二氢异黄酮,研究证实鸢尾苷元具有较强的抗氧化作用,具有减轻对CC14和H202诱导的肝脏损伤作用,高浓度的鸢尾苷元还能促进体外培养的肝星形细胞的凋亡,从而抑制肝脏纤维化的作用。本实验研究目的是了解鸢尾苷元对肝缺血再灌注损伤的保护作用和相关分子机制的研究。研究方法：方法：SD大鼠随机分为5组(n=6)：假手术组(SM)、模型组(IR)、溶媒组(DMSO)、鸢尾苷元小剂量(T25mg/kg,T25)和鸢尾苷元大剂量(T50mg/kg,T50)组。缺血前48h,24h和缺血前1h,分别于鸢尾苷元干预组大鼠腹腔内注射25mg/kg和50mg/kg的鸢尾苷元,其他各组分别注射等体积生理盐水和DMSO溶液。本实验用Yoshizumi等方法建立肝左、中叶70%部分肝缺血再灌注模型。再灌注4小时后各实验组采集血液和肝脏组织样本。检测血清中ALT活性作为肝功能损伤的指标,同时用ELISA法检测肝组织中MPO、SOD、XOD、GSH-Px、MDA、NO和iNOS含量。以及检测血液TNF-α,ICAM-1和IL-10的含量和肝脏组织TNF-αmRNA, ICAM-1mRNA和IL-1OmRNA的表达情况,同时检测肝脏组织中NF-κB的蛋白表达情况。研究结果：大鼠缺血60min,再灌注后ALT的峰值出现在再灌注后4h,所以选择再灌注后4h的标本作为检测标本。与IR和DMSO组相比,小、大剂量鸢尾苷元干预组血清ALT含量均明显下降(p<0.01),鸢尾苷元大剂量干预组较小剂量组血ALT浓度下降更明显(p<0.05)；鸢尾苷元干预组肝脏组织病理学表现明显改善,且与ALT水平一致；鸢尾苷元干预后肝组织MPO、MDA、XOD含量较模型对照组(IR)和DMSO明显下降；而SOD和GSH-Px含量则明显上升；同时鸢尾苷元干预组肝脏组织中NO含量明显下降和iNOS的活性明显降低,且呈剂量相关性。(p<0.05)。鸢尾苷元干预组血炎症因子TNF-α, ICAM-1较IR组和DMSO组明显降低,肝脏组织TNF-α mRNA, ICAM-1mRNA的表达较IR组和DMSO组明显降低,与血清TNF-α, ICAM-1一致。鸢尾苷元干预组肝脏NF-κB蛋白较IR组和DMSO组明显降低。鸢尾苷元干预组血抗炎因子IL-10较IR组和DMSO组明显升高,肝脏组织中IL-10mRNA的表达较IR组和DMSO组明显增强。研究结论：1、鸢尾苷元干预能有效改善大鼠肝脏部分热缺血再灌注损伤引起的肝功能和肝脏病理损害；2、鸢尾苷元能减少大鼠肝脏缺血再灌注后氧自由基的产生,减轻脂质过氧化引发的组织损伤和促进内源性抗氧化酶活性增强。同时它能减少肝脏缺血再灌注后活性氮的产生；3、鸢尾苷元干预能够减轻大鼠肝脏热缺血再灌注损伤后中性粒细胞的聚集浸润和活化,减轻炎症因子的活化和增强抗炎因子水平,从而减轻肝脏组织炎症反应。第二部分鸢尾苷元对大鼠缺血再灌注肝脏Bcl-2和Caspase-3表达的影响研究目的：肝缺血再灌注损伤是临床肝脏外科手术常见的病理生理现象,可发生在休克、肝移植、肝部分切除以及其它一些需要肝门阻断等外科手术过程中,可导致原发性移植物的无功能和手术失败。过去一直认为肝缺血再灌注损伤只出现细胞坏死,坏死是肝脏缺血再灌注细胞损伤的典型表现,但是随着研究的深入,缺血再灌注肝脏组织中也可出现细胞凋亡,而且人们发现细胞凋亡明显增多是造成器官功能不全的重要原因,并且在缺血再灌注早期,肝损伤以肝细胞和内皮细胞凋亡为主,肝实质细胞凋亡还可引发肝脏组织细胞一系列坏死性改变。肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的机理尚不清楚,许多研究证实线粒体通路在肝脏细胞凋亡中起着非常重要的作用。可能在缺血缺氧过程中,线粒体通透性改变诱导凋亡的发生。各种因素造成细胞内钙超载导致细胞凋亡,氧自由基直接损伤DNA,导致蛋白质交联,使得具有酶活性的蛋白质功能丧失,改变细胞的表型特征而诱导细胞凋亡。许多研究表明,细胞凋亡的发生主要受凋亡相关基因和酶的调控,这些基因和酶包括起诱导作用的如Caspase家族的酶类和起抑制作用的如bcl-2等,这些促凋亡因素和抑制凋亡因素相互作用,决定了凋亡的启动和抑制。有学者研究发现鸢尾苷元对t-BHP (tert-butyl hyperoxide)诱导的肝HepG2细胞损伤有明显的保护作用,在用t-BHP诱导的HepG2细胞内发现有Caspase-3前体物质活化和DNA片段的出现,但是上述现象能被鸢尾苷元所抑制,所以作者推测鸢尾苷元可能通过抑制凋亡等途径对由t-BHP诱导的肝细胞具有保护作用。本实验通过建立70%肝脏缺血再灌注损伤模型,了解鸢尾苷元对缺血再灌注肝脏细胞凋亡的影响。研究方法：方法：SD大鼠随机分为5组(n=6)：假手术组(SM)、模型组(IR)、溶媒组(DMSO)、鸢尾苷元小剂量(T25)和鸢尾苷元大剂量(T50)组。缺血前48h,24h和1h干预组大鼠腹腔内注射25mg/kg和50mg/kg的鸢尾苷元,其他组分别注射等体积生理盐水或DMSO.建立肝左、中叶70%部分肝缺血再灌注模型。再灌注4小时后各实验组采集血液和肝脏组织样本。Tunnel法检测各组肝脏细胞凋亡情况以及检测肝脏组织中Bcl-2mRNA和Caspase-3mRNA表达情况和Bcl-2和Caspase-3蛋白在肝脏组织中的表达情况。研究结果：与IR组和DMSO组相比,鸢尾苷元干预组肝脏凋亡细胞数明显降低,Bcl-2mRNA和蛋白表达明显升高,Caspase-3mRNA和蛋白表达明显降低。(P<0.01)。研究结论：1、鸢尾苷元干预能有效改善肝细胞的凋亡情况。2、鸢尾苷元能够抑制Caspase-3的表达。3、鸢尾苷元能够促进肝脏Bcl-2的表达。