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白介素-15(Interleukin15,IL-15)是四螺旋束细胞因子家族的一员,具有T细胞生长因子活性。IL-15在先天性和适应性免疫细胞的动态平衡,特别是NK细胞和CD8+记忆细胞的发育中具有重要作用。在慢性病毒感染,比如丙型肝炎病毒感染中,IL-15可能在特殊免疫反应的刺激中起作用。土拨鼠(woodchuck)模型是肝DNA病毒感染和治疗性干涉的可用动物模型。本研究中利用不同的表达系统将wIL-15蛋白在原核细胞和昆虫细胞中表达,并将得到的纯化蛋白作用于小鼠脾细胞,研究其对小鼠脾细胞增值的影响。
丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)是输血后及散在性的非甲非乙型肝炎(Non-A,Non-B Hepatitis,NANBH)的主要病因。近期,一些研究组织报道的HCV体外培养体系使HCV的基础研究得到长足发展。为了建立HCV中国株的感染性克隆,本研究分离并克隆了HCV-Hubei株cDNA基因组。
本文分为三个章节
第一章:对HCV及HBV的发现、基因组结构和基因型的特点和分布、检测手段、治疗方法等做了简要综述。并对wIL-15基因的功能及蛋白表达系统进行简要介绍。
第二章:使用p-MAL表达系统和Bac-to-Bac系统将wIL-15蛋白在原核细胞和昆虫细胞中进行表达。通过离子交换层析柱法纯化得到55 kDa的MBP-wIL-15蛋白,并用Factor Xa切除MBP标签蛋白。分别将切除前后的蛋白作用于小鼠脾细胞,均未见有促进细胞增殖的作用。真核表达的蛋白因有翻译后修饰过程,分子量大于理论值,为18 kDa。
第三章:描述了HCV-Hubei株全基因组克隆的构建,测序分析所克隆HCV-Hubei株的基因组全长为9405nt(GenBank accession number: EF638081),属于HCV1b亚型,亲缘关系与同为中国分离株的HCV-shanghai(AY460204)最为接近。目前为止已将全长cDNA克隆到3个大片段质粒上,分别为3kb,4.9kb和2kb。分析得出,全基因组含有一个8952nt开放阅读框,编码一个2864aa的多肽。