论文部分内容阅读
线粒体是细胞生长的重要调节者,是机体进行氧化磷酸化的主要场所。心肌缺血时,线粒体动态网络结构被打破,线粒体功能紊乱。因此,探索一种以线粒体为作用靶点的药物对于心脏功能的恢复来说尤为重要,对于心血管疾病的治疗也是一大突破。异甜菊醇是天然植物成分甜菊苷的酸性水解产物,将其改造成钠盐形式即异甜菊醇钠(Isoteviol sodium,STVNa),增加水溶性并提高生物利用度。大量研究表明,异甜菊醇具有抗高血糖、抗高血压、抗炎和抗肿瘤活性,同时对心肌缺血复灌损伤也有保护作用,但其作用机制仍不明确。本研究主要通过建立体外心肌细胞缺血复灌模型,探讨STVNa对心肌缺血复灌损伤线粒体的保护作用及其机制,主要内容如下:1、通过H9c2心肌细胞缺氧90 min复灌90 min来研究复灌给药对其保护作用,结果表明,与control组(0.982±0.007)相比,IR组(0.567±0.007)细胞活性下降50%左右,10μM STVNa处理组(0.627±0.013)能够显著提高IR损伤的细胞活性(P<0.05);进一步研究发现1μM、10μM、100μM STVNa还能恢复线粒体膜电位(MMP),MMP相对值由IR组34.7%±0.6%分别上升至51.6%±4.3%、62.9%±2.8%、80.4%±5.9%(P<0.05);减少复灌引起的活性氧(ROS)爆发,ROS相对值由IR组130.9%±2.4%分别下降至110.9%±2.0%、103.5%±3.1%、101.6%±0.8%(P<0.05);并对细胞凋亡有显著抑制作用,细胞凋亡率由IR组的45.7%±3.6%分别下降至34.0%±3.4%、25.8%±1.4%、21.3%±0.9%(P<0.05)。2、研究STVNa对线粒体分裂与融合的调控作用,结果表明,IR会引起线粒体异常分裂,线粒体片段化增加,而STVNa能够抑制这种现象;细胞免疫荧光和Western blot实验发现其与线粒体分裂蛋白Drp1、Fis1有关,与control组(1.00±0.10、1.00±0.07)相比,IR组Drp1、Fis1蛋白表达水平(1.74±0.06、1.76±0.06)显著增加(P<0.05),10μM、100μM STVNa处理组分别降低Drp1蛋白表达水平至1.21±0.06、1.15±0.08(P<0.05),分别降低Fis1蛋白表达水平至1.47±0.05、1.25±0.04(P<0.05),从而对心肌缺血复灌损伤线粒体产生保护作用。结论:STVNa对心肌缺血复灌引起的线粒体损伤具有显著地保护作用,其具体作用机制可能与STVNa抑制线粒体分裂,从而减少细胞内活性氧,降低细胞凋亡率有关。