“益肾调督”针灸法对AD模型大鼠海马神经元线粒体COXⅣ、Cyp-D影响的研究

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目的研究“益肾调督”针灸法,对AD模型大鼠海马神经元中,线粒体能量代谢相关蛋白细胞色素氧化酶C(COXⅣ)的影响,以及对线粒体通透性转换孔mPTP相关蛋白亲环蛋白D(Cyp-D)的影响。结合分子生物学,探讨“益肾调督”针灸法在AD发病过程中,保护线粒体功能,减少线粒体损伤的可能作用机制。以进一步明确针灸防治AD的作用机制,为AD的针灸临床治疗,提供更多的理论依据和数据支撑。方法方法:将40只Wistar大鼠通过Morris水迷宫测试筛选(即淘汰反应较为迟钝或及其敏感的大鼠),合格者按随机数字表分为4组,即正常组、假手术组、模型组和针灸治疗组,每组10只。AD模型复制通过在大鼠双侧海马区,注射Aβ1-42,每侧5微升,进行模型复制。针灸治疗组先针刺“百会”和“肾俞”穴,每次15min,针刺结束后,再对“百会”和“肾俞”穴经行艾灸治疗,选用美容艾条(直径约0.6cm),灸治15min。7天为一个疗程,疗程间休息1天,总共治疗15天(两个疗程)。治疗结束后断头取材。通过免疫组化法观察大鼠海马线粒体中Cyp-D、COXIV的表达水平。分析统计各组差异。结果1.Cyp-D蛋白免疫组化结果:通过对比平均光密度及平均灰度,可见模型组Cyp-D的表达明显高于正常组和假手术组(P<0.01),而针灸治疗组Cyp-D的表达显著性降低,与模型组比较具有统计学意义(P<0.01)。2.COXIV蛋白免疫组化结果:通过对比平均光密度及平均灰度,可见模型组COXⅣ的表达明显低于正常组和假手术组(P<0.01),而针灸治疗组COXⅣ的表达显著性提高,与模型组比较具有统计学意义(P<0.01)。结论1.益肾调督法充分切合“阿尔茨海默病”年老体衰,肾虚髓空,脑海失养的病因学特点,能有效的防治AD的发生与发展。2.针灸能有效的降低Cyp-D的表达,避免线粒体通透性转换孔(mPTP)通道异常开放,进而维护线粒体功能,从而达到延缓AD进程的目的。3.针灸可以提高COXⅣ的活性,改善线粒体呼吸链的功能,增加ATP含量,减少神经元细胞凋亡和老年斑形成,进而起到防治AD的作用。4.肾调督针灸法可能是通过减低线粒体膜通透性,提高线粒体能量代谢能力,降低线粒体损伤率,进而减少Aβ所造成的线粒体损伤,保持神经元细胞活性,发挥神经元防护作用,防治AD的发生。
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