肝素精制及低分子量肝素的制备

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本文主要研究了肝素的精制及低分子量肝素的制备。 首先采用过氧化氢二次氧化法精制肝素。在该过程中采用了低温离心技术,解决了在除酸性蛋白过程中,沉淀不易滤除的困难。另外,在粗品肝素钠中残留一些杂蛋白,在纯化过程中这些杂蛋白很难被除去。在粗品肝素钠中加入胰蛋白酶对这些杂蛋白进行酶解,再结合氧化除杂过程,从而提高了精品肝素钠的效价和效价回收率,确立了一条合理的精制肝素的工艺过程。 肝素在氧化过程中,结构发生破坏,使得很难制备出高效价的产品。为此,本人对被氧化的肝素产品加入硼氢化钠进行还原处理,结果产品效价明显提高,且产品较白,对还原条件进行了详细探讨。 肝素是一种酸性粘多糖,采用强碱性Ⅰ型离子交换树脂D208对肝素进行静态和动态吸附过程研究。静态吸附确立了树脂D208对肝素的吸附条件、吸附等温线,初步探讨了吸附动力学。吸附等温线附合Langmuir模型。动态过程主要是对肝素进行精制,对D208树脂精制肝素工程中的影响因素作了理论分析,确立了精制肝素的工艺过程,实验结果表明:D208树脂精制肝素的抗凝效价为155U/mg,效价回收率92.1%,紫外区吸收符合药典要求。 本文分别以猪肠粘膜肝素粗品和精品为原料,采用亚硝酸控制解聚法制备分子量在4000~7000D的低分子量肝素。采用正交实验法讨论了反应温度、时间、亚硝酸浓度、溶液pH值等条件对解聚反应的影响。测定了产物的分子量,经Sephacryl S-200 HR凝胶色谱柱对解聚的低分子量肝素进行分离纯化,初步探讨了其分子量的分布。由红外光谱,Hnmr,13Cnmr谱图对其结构作了鉴定。结果表明:亚硝酸控制解聚法制备低分子量肝素,反应条件温和,成本低,产率高,容易推广。使用粗品肝素作原料,在相同的条件下,制得产品分子量偏高,但仍能满足药典的要求,而且,成本较为低廉,工业化前景更为广阔。
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