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目的:基因扩增是肿瘤发生过程与演进过程中常见表型,而双微体是基因扩增的两种主要形式之一。通过双微体上所携带的原癌基因和耐药基因为肿瘤细胞提供生存优势与耐药特性。因此本研究希望通过使用低浓度羟基脲诱导降低肿瘤细胞中的双微体数量,检测双微体去除后肿瘤细胞恶性表型的改变情况。
方法:首先通过无限稀释法获得含有双微体数目存在明显差异的多个细胞亚克隆,从中选取含双微体多(数目)的克隆1和含双微体少(数目)的克隆8作为进一步研究的对象。
通过实验确定了HU对UACC-1598细胞诱导双微体去除的最佳作用时间为两周,适宜作用浓度为100μmol/L和150μmol/L1。用这两个药物浓度去诱导单克隆1和单克隆8。为了对比两个单克隆群的生长速度、成瘤能力和迁移能力的改变,我们做了生长曲线的绘制、克隆形成实验和细胞迁移实验。通过对比两个单克隆群的生长速度、成瘤能力和迁移能力的改变,对双微体在细胞功能上的影响进行比较。
结果:通过比较我们看到克隆1细胞的生长速度、成瘤能力和迁移能力均明显强于克隆8。通过对两个单克隆群各功能学实验中100μmol/L和150μmol/L的结果分析,我们发现虽然100μmol/L和150μmol/L的双微体去除效果接近,但在整体上100μmol/L药物诱导双微体去除后对细胞各项功能的抑制效果高于150μmol/L的药物。
结论:1、含不同数目双微体细胞亚群在功能上存在明显的差别;2、对于含不同数目双微体的同系肿瘤细胞,HU的作用存在差异。这提示在临床上应用HU进行肿瘤疾病治疗时,对于含有双微体的肿瘤患者和不含有双微体的肿瘤患者应有不同的用药方式。