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目的:本文利用人非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC）A549细胞、A549裸鼠皮下移植瘤模型对氨氯地平（Amlodipine,Aml）单独或联合吉非替尼（Gefitinib,Gef）的抗肿瘤作用及其分子机制进行了体内外研究,为钙通道阻滞剂（Calcium channel blocker,CCB）及其与抗肿瘤药物的联合应用在抗肿瘤新方向的开发提供了理论依据和实验基础。方法:1.利用MTT法检测一系列浓度的氨氯地平、吉非替尼在人非小细胞肺癌A549细胞的增殖抑制活性。2.利用流式细胞术检测氨氯地平对A549细胞凋亡、周期的影响,凋亡实验采用Annexin V-FITC/PI双染法,周期实验应用碘化丙啶（Propidium iodide,PI）染色。3.利用Western Blot方法检测氨氯地平作用于A549细胞后,细胞周期相关的周期蛋白cyclin D1、抑制因子p27、p21的表达以及Rb的磷酸化水平变化。4.利用Western Blot法检测氨氯地平作对A549细胞中磷酸肌醇3激酶（Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）通路关键蛋白3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（3-phosphoinositide-dependent protein kinase 1,PDK1）、蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）、核糖体S6蛋白激酶（p70 S6 Kinase,p70 S6K）、哺乳动物雷帕霉素靶点（Mammalian target of rapamycin,m TOR）、糖原合成酶激酶-3β（Glycogen synthase kinase 3 beta,GSK-3β）和丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）通路中c-Raf（Rapidlyaccelerated fibrosarcoma）、细胞外调节蛋白激酶（Extracellular regulated protein kinases,ERK）的磷酸化水平变化。5.利用细胞划痕实验检测氨氯地平对A549细胞迁移的影响。6.利用MTT实验结合Calcusyn软件,采用Chou-Talalay法筛分析氨氯地平与吉非替尼联用对A549细胞增殖抑制的联合指数。7.利用PI染色结合流式细胞术检测氨氯地平与吉非替尼联用时对A549细胞周期分布的影响,并利用Western Blot法检测联用后cyclin D1、p27表达量和Rb磷酸化水平的变化。8.利用Western Blot法检测氨氯地平与吉非替尼联合作用于A549细胞后PI3K通路中Akt、m TOR、p70 S6K、GSK-3β的磷酸化水平变化。9.建立裸鼠皮下移植瘤模型,给予氨氯地平、吉非替尼或两药联用,以肿瘤体积变化观察两药物联用后对人非小细胞肺癌A549肿瘤生长抑制的体内活性。结果:1.钙通道阻滞剂氨氯地平能够抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖,并呈剂量依赖性,其对A549细胞无凋亡诱导作用,但可以促使细胞周期G0/G1期阻滞。2.氨氯地平作用使A549细胞中cyclin D1降表达、Rb的磷酸化水平下调、周期抑制因子p21、p27上升,且使A549细胞中Akt、m TOR、p70 S6K、GSK-3β的磷酸化均呈下调趋势,c-Raf与ERK1/2磷酸化水平也均有显著下降。3.与对照组相比,氨氯地平处理过的A549细胞愈合程度明显减弱。4.氨氯地平与吉非替尼在浓度比IC50 Gefitinib:IC50 Amlodipine=1:1联合作用于A549细胞时,比两药物单用时抑制作用均显著增强,具有协同作用。5.氨氯地平与吉非替尼联用于A549细胞时,G0/G1期阻滞作用显著增强,且p27的表达升高,cyclin D1表达与Rb磷酸化下降,PI3Ks通路关键蛋白Akt、p70 S6K、m-TOR、GSK-3β的磷酸化水平也较单给药时降低。6.氨氯地平10 mg/kg对非小细胞肺癌A549皮下移植瘤的生长有较强抑制作用,氨氯地平与吉非替尼联用时肿瘤生长水平较单药组显著降低。结论:1.钙通道阻滞剂氨氯地平对非小细胞肺癌A549细胞增殖和迁移有一定的抑制作用,其对增殖的作用可能是通过抑制PI3Ks和MAPKs通路而将A549细胞周期阻滞于G0/G1期实现的。2.钙通道阻滞剂氨氯地平与非小细胞肺癌靶向药吉非替尼联用可以协同抑制A549细胞增殖,并能更显著阻滞细胞周期于G0/G1期,对PI3Ks通路关键蛋白Akt、p70 S6K、m-TOR、GSK-3β的磷酸化水平也较单给药时更低。3.氨氯地平单独或联合吉非替尼对非小细胞肺癌A549皮下移植瘤的生长有较强抑制作用,联用时肿瘤生长显著受抑制。