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本研究以作者分离的细菌为研究对象，对分离菌株的生化、生物学特征进行鉴定，通过对分离菌株进行细菌的菌落形态、菌体染色镜检、"卫星现象"试验、CAMP试验、V因子依赖试验、生化鉴定试验及PCR检测，判断分离的细菌为胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，App)。
参照GenBank中己发表的ApxⅣ基因序列，设计合成一对引物，以分离出.App的DNA为模板利用PCR方法扩增出ApxⅣ3端，大小为552bp的保守基因序列。将PCR产物克隆到pMD18-T Simple Vector中，获得重组质粒pMD-ApxⅣ，酶切鉴定后进行测序，应用DNASTAR分析软件与GenBank上已发表的参考菌株序列，进行核苷酸及其推导氨基酸同源性比较，结果表明：以本菌株扩增的基因与参考菌株的核苷酸序列同源性为99.1％，推导的氨基酸序列同源性为98.9％。
将重组质粒pMD-ApxⅣ进行BamHI、HindⅢ双酶切，并将酶切产物克隆到原核表达载体pET-32a(+)，构建了重组表达质粒pET-ApxⅣ。将表达质粒转化至大肠杆菌BL21中，用IPTG诱导表达，通过SDS-PAGE和Western blot分析，结果表明pET-ApxⅣ在BL21中成功表达，表达蛋白能被App阳性血清所识别，具有良好的免疫原性。同时对诱导的条件进行优化，确定最适的诱导表达条件为：IPTG的最适浓度为2mmol/L，最适的起始诱导时间为2h，最适的诱导时间为6h。
将诱导后的菌体进行超声破碎，SDS-PAGE分析表明表达蛋白以包涵体的形式存在。大量诱导表达重组蛋白，利用HiTrap FF crude columns将表达的蛋白进行纯化，用纯化的重组蛋白抗原作为ELISA包被抗原，通过对抗原包被浓度、血清稀释倍数、酶标二抗稀释倍数、抗原和血清反应时间、血清和酶标二抗反应时间、显色剂作用时间和终止液滴加量等一系列条件进行优化，建立了检测App抗体的间接EIASA方法。通过特异性试验证明，该ELISA方法特异性较强。将建立的ELISA方法与IDEXX公司的标准试剂盒检测方法进行比较，两种方法检测结果的吻合程度较高，说明建立的ELISA方法比较敏感，能够丰富App的国内ELISA检测方法。