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巴西橡胶树是多年生的异花授粉乔木,由于育种周期长、遗传基础较狭窄、多基因杂合状态,传统的杂交育种及杂种优势的利用受到限制。目前品种选育主要是用常规育种,其材料均来源于魏克汉系统的品系及其衍生的无性系。因此,探索其他育种方法,缩短育种周期,提高育种效率,克服传统育种的缺陷,具有重要意义。橡胶树细胞悬浮培养物具有生长旺盛,取材方便,易培养,试验重复性好,不受季节和环境条件的限制等优点,不仅可直接用于原生质体分离、培养与杂交,获取次生代谢产物,进行大规模的无性系繁殖,还可以在短期内在细胞水平筛选出所需要的突变体。本实验建立了橡胶树杂交种B1(Hevea brasiliensis×H.nitida)悬浮细胞再生体系,并利用悬浮细胞进行电激共转化研究,以期为今后橡胶树细胞工程研究奠定基础,主要结果如下：1.胚性细胞悬浮系的继代培养：取10mL细胞悬浮液接种到100mL三角瓶中,吸干培养基,添加20mL新鲜悬浮培养液(M1)[改良的MS培养基并添加2.0mg/L 2,4-D、1.Omg/LNAA、1.Omg/LKT、0.1g/L肌醇、70g/L蔗糖、5%(V/V)椰子水],7-9d继代一次,改变接种量和摇床转速,可以降低接种频率2.悬浮细胞诱导胚性愈伤组织：悬浮细胞接种到诱导愈伤组织培养基(M2)[改良的MS培养基并添加1.5mg/L 2,4-D、1.0mg/LNAA、0.5mg/LBAP、0.1g/L肌醇、70g/L蔗糖、5%(V/V)椰子水、2.2g/L植物凝胶]上可诱导出愈伤组织,诱导率达100%；同时可将愈伤组织接种到M2,进行长期继代与增殖,生长状态良好,胚性不会消失。3.体细胞胚诱导和成熟：将橡胶树B1品种胚性愈伤组织接种到体细胞胚诱导培养基(M3)[改良的MS培养基添加0.9mg/L KT、2mg/LBAP、0.01mg/L NAA、0.1mg/LGA、0.1mg/L肌醇、70g/L蔗糖、5%(V/V)椰子水、2.2g/L植物凝胶]上,可诱导体细胞胚的发生,继代1-2次,体细胞胚即可成熟。4.植株再生：将橡胶树B1品种成熟体细胞胚接种植株再生培养基(M4)[改良的MS培养基并添加0.5mg/LKT、0.2mg/LIAA、3.0mg/LGA3、70g/L蔗糖、5%(V/V)椰子水、2.2g/L植物凝胶]上,可诱导植株再生,植株再生率达16.6%。5.电激体系优化：采用均匀设计,以电场强度(X1)18水平,电容(X2)、蔗糖浓度(X3)2因素各6水平,电阻(X(4)、生长状态(X5)、DNA浓度(X6)、抽真空压强(X7)4因素各3水平作为考察因素,以瞬时表达率(Y1)和细胞成活率(Y2)为因变量,组成综合结果(Y1+Y2),优化电激体系参数,得出最佳电激体系为：电场强度为1300v/cm、电容为10uF、蔗糖浓度为0.4M、电阻为2Kn、培养天数为3d、质粒浓度为90ug/ml、抽真空压强为600mbar时,悬浮细胞系的瞬时表达率、细胞成活率均能达到最优,分别为0.6555%和57.9262%。6.电激共转化分析：利用上述的电激参数,将标记基因表达框(GFP或GUS):目的基因表达框(HbCBFl):目的基因表达框(Kana)=1：1：1浓度进行电激共转化,成功获得橡胶树B1品种转化愈伤,对95个愈伤提DNA,进行PCR检测,其中10个呈阳性,初步得出共转化效率为1.05%,但没能进一步得到转基因植株。