【摘 要】
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目的:探索结核分枝杆菌HupB蛋白对小鼠抗原递呈细胞和Na（?）ve CD4+T细胞极化的影响及细胞免疫作用。材料方法:重组表达结核分枝杆菌HupB蛋白,质谱检测重组蛋白分子量。并用重组HupB蛋白刺激小鼠巨噬细胞、树突状细胞（DC）和Na（?）ve CD4+T细胞,方法如下:（1）体外条件下刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞系,实时定量PCR方法检测NF-κB m RNA表达情况,同时经ELISA
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目的:探索结核分枝杆菌HupB蛋白对小鼠抗原递呈细胞和Na（?）ve CD4+T细胞极化的影响及细胞免疫作用。材料方法:重组表达结核分枝杆菌HupB蛋白,质谱检测重组蛋白分子量。并用重组HupB蛋白刺激小鼠巨噬细胞、树突状细胞（DC）和Na（?）ve CD4+T细胞,方法如下:（1）体外条件下刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞系,实时定量PCR方法检测NF-κB m RNA表达情况,同时经ELISA方法检测培养上清中的IL-6和TNF-α释放水平;（2）体外刺激小鼠骨髓源树突状细胞（BMDC）,用流式细胞术检测CD80、CD86及MHC-II表面分子表达水平;ELISA检测培养上清中细胞因子分泌量;（3）用经过HupB刺激后的BMDC与相同品系的小鼠Na（?）ve CD+4 T淋巴细胞共培养,实时定量PCR检测Th1、Th2、Th17、Treg细胞各自的特异转录因子T-bet、GATA3、ROR-γt和Fox P3的m RNA表达情况;ELISA检测培养上清中IFN-γ释放情况。结果:质谱结果显示重组蛋白分子量为24.79KDa,与NCBI中给出的HupB分子量与质粒上增加的氨基酸分子量一致;HupB刺激RAW264.7巨噬细胞结果显示:与未经刺激组（Control）相比,经过HupB刺激后巨噬细胞NF-κB m RNA表达上调,IL-6分泌量上调,TNF-α分泌量与Control相比无显著差异。HupB刺激小鼠骨髓来源树突状细胞结果显示:与Control组相比,HupB刺激后DC表面分子CD80、CD86和MHC-II表达上调,ELISA结果显示刺激后IL-6、白介素-12p40、IFN-γ和TNF-α分泌上调,白介素-10分泌下调;进一步将HupB刺激的DC与小鼠Na（?）ve CD4+T细胞共培养,结果显示经过HupB刺激的DC诱导的Na（?）ve CD4+T细胞中Th1细胞特异转录因子T-bet表达上调,培养上清中IFN-γ分泌增加。结论:（1）HupB蛋白通过NF-κB信号途径激活小鼠巨噬细胞释放IL-6,诱导结核分枝杆菌宿主保护性免疫;（2）HupB蛋白能够诱导小鼠树突状细胞成熟,促进树突状细胞抗原递呈并释放促炎性细胞因子,从而诱导小鼠Na（?）ve CD4+T细胞向Th1细胞极化,释放IFN-γ,引起Th1型保护性免疫。本实验为MTB蛋白-宿主相互作用机制及后续基于抗原的MTB诊断和治疗提供参考。
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