淄博地区猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及免疫预防研究

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猪传染性胸膜肺炎(Porcine Pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneumoniae,APP)引起的一种常见的呼吸道传染病,各年龄的猪只均可感染。猪群感染胸膜肺炎放线杆菌后,当遇到气候环境突变,通风不良等应激因素时,猪只抵抗力下降,可诱发本病,主要表现为精神沉郁,体温升高,呼吸困难等临床症状,并出现特征性的出血性肺炎和胸膜炎。本病在世界各养猪国家普遍存在,近年来,流行日趋严重,成为大规模养猪的五大疫病之一。本研究共分为二部分:第一部分:猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定本实验对分离自淄博市不同地区的疑似胸膜肺炎放线杆菌进行分离培养、生化鉴定、PCR鉴定、药敏试验、动物实验等研究。研究结果发现该分离菌中有20株细菌为多形态、革兰氏阴性杆菌;生化实验和PCR扩增鉴定结果表明所分离的上述20株菌株为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。对确诊的20株胸膜肺炎放线杆菌进行血清型鉴定,结果发现在淄博地区流行的胸膜肺炎放线杆菌主要为血清5型和血清7型。其中,血清5型13株、血清7型7株,血清5型为相对优势的血清型。第二部分猪传染性胸膜肺炎放线杆菌油乳剂二价灭活疫苗的制备及小鼠免疫保护试验根据淄博地区猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的流行情况,制备了血清5型、7型二价灭活疫苗。以该疫苗免疫小白鼠,进行同源攻毒保护试验,结果该疫苗在0.6ml/只的免疫剂量下可对小白鼠产生较强的保护作用,用同血清型菌株对免疫后的小白鼠攻毒,仅表现肺脏轻微出血,无死亡,而对照组未经免疫直接攻毒的小白鼠全部死亡,肺脏严重出血;小白鼠免疫后第5d就可以检测到抗体,并且抗体水平上升较快,到第15d抗体达到最高水平,之后,抗体水平开始下降,但下降幅度不大,可持续1个月左右;用自制的疫苗和市场上购买的疫苗同时对仔猪进行同源攻毒保护实验结果对照组表现明显的胸膜肺炎症状、肺脏严重出血且有两头死亡;市场上购买的疫苗免疫组出现出现明显的厌食、喘气、呼吸困难等急性胸膜肺炎症状;自制疫苗免疫组只有一头出现轻微症状,20h后恢复正常。上述结果表明自制的二价灭活疫苗对胸膜肺炎放线杆菌有坚强的保护作用。
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