循环miRNA-93在PCOS大鼠模型中的表达分析及诊断价值探索

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背景:  多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)是下丘脑-垂体-卵巢轴紊乱引发的内分泌系统紊乱性疾病,多表现为雄激素过多、排卵及月经异常、血脂升高以及胰岛素抵抗为主要特点。PCOS是具有生殖功能女性的最易见的内分泌疾病之一,据全世界统计PCOS发生率约5%~10%,在排卵障碍性患者中发生率为 70~80%[1]。由于PCOS具有特异性,迄今为止,其发病原因尚未明确,相关报道表明可能是由某些遗传原因与环境共同作用所导致[2-3]。目前国际上PCOS 的诊断标准尚未统一,最为常用的临床诊断方法有超声检测、内分泌激素测定、诊刮、腹腔镜等[4]。循环(血清或血浆中)miRNA 具有敏感性、含量丰富、结构稳定、耐核酸酶并且容易检测到等优势[5-6],临床上可以作为各种疾病的诊断标志物。用于各系统疾病的初期筛查以及区分高危患者。本文旨在研究miRNA-93 及其靶基因血管内皮生长因子 A(Vascular Endothelial Growth FactorA,VEGFA)在PCOS大鼠模型血清和卵巢组织中的表达及相关作用分析,以期为PCOS的临床诊断与病因治疗提供新的目标靶点。  目的:  通过检测PCOS大鼠模型血清与卵巢组织中miRNA-93及VEGFA的表达水平,研讨miRNA-93及VEGFA在PCOS发生发展过程中的作用与诊断价值。  方法:  选用3~4周大小的SD雌性大鼠,随机设为实验与对照组,每组20只。实验组中每日同一时间颈背部皮下注射脱氢表雄酮(DHEA),按照100g大鼠中加入6mgDHEA 的比例,然后溶于0.2ml注射油剂配制;另一组大鼠同一时间颈背部皮下注射0.2ml 无菌注射大豆用油剂。28 天后观察两组大鼠的动情周期、体重、性激素水平、卵巢形态学、卵巢体积、OGTT 血糖、空腹血清胰岛素(FINS)、RI 指数(HOMA-IR)及血脂等代谢相关指标的变化。采用下列方法来验证模型是否成功:对大鼠阴道分泌物进行细胞涂片,采用巴氏染色进行涂片染色,显微镜下观察两组大鼠的动情周期,测定大鼠血清促卵泡生成素(FSH)、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、空腹胰岛素(FINS)、雌二醇(E2),计算 HOMA1-IR。对大鼠的体重与卵巢进行称量,苏木精-伊红染色法(HE)染色,并进行观察。RT-PCR 法检测大鼠血清和卵巢组织中miRNA-93 表达,ELISA 法检测血清中VEGFA表达,免疫组化(IHC)、Western blot法分析卵巢组织中VEGFA蛋白表达量。  结果:  实验组大鼠无规律的动情周期,卵巢色泽苍白、体积增大,外观呈多囊样变,血清 FSH、T、LH 升高,糖耐量异常,FINS及其RI指数明显高于对照组,血清胆固醇、甘油三酯高于对照组,以上结果表明PCOS大鼠模型构建成功。RT-PCR、ELISA、Western blot、IHC 等结果显示,miRNA-93及靶基因VEGFA在PCOS大鼠模型的血清、卵巢组织中表达一致且显著升高(P<0.05)。  结论:  1、DHEA 为造模药物,构建SD雌性大鼠PCOS模型与PCOS患者类似,卵巢组织及内分泌水平异常并伴有胰岛素抵抗性。  2、MiRNA-93 及靶基因VEGFA的表达上调,在PCOS发生发展中起重要作用,循环miRNA-93在PCOS诊断中可作为一种新型非侵入性诊断标志物。
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