【摘 要】
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目的探讨c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)或JNK2过表达对人皮肤鳞状细胞癌细胞SCL-1增殖和凋亡的影响及分子机制。方法将JNK1、JNK2分别与pHBAD-EF1-MCS-3flag-CMV-GFP载体结合,构建JNK1和JNK2的重组腺病毒表达载体,转染SCL-1细胞,优化转染条件,实时荧光定量PCR技术(qPCR)和Western Blot技术鉴定过表达效果;CCK-8(cell cou
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目的探讨c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)或JNK2过表达对人皮肤鳞状细胞癌细胞SCL-1增殖和凋亡的影响及分子机制。方法将JNK1、JNK2分别与pHBAD-EF1-MCS-3flag-CMV-GFP载体结合,构建JNK1和JNK2的重组腺病毒表达载体,转染SCL-1细胞,优化转染条件,实时荧光定量PCR技术(qPCR)和Western Blot技术鉴定过表达效果;CCK-8(cell counting kit-8)法测定SCL-1细胞的增殖活性,细胞克隆形成实验反应细胞集落形成能力;细胞划痕实验检测细胞融合率;流式细胞术检测细胞凋亡水平;qPCR检测JNK1、JNK2、c-Jun mRNA相对表达水平;Western blot法检测磷酸化c-Jun的蛋白表达水平。结果成功构建JNK1/JNK2过表达腺病毒载体;JNK1、JNK2过表达腺病毒载体最佳转染条件为MOI=100,转染48h;转染后,SCL-1细胞的JNK1和JNK2的表达水平显著升高(P<0.05);与对照组相比,Ad-JNK1组细胞增殖和抗凋亡能力无显著影响(P>0.05),Ad-JNK2组细胞增殖和抗凋亡能力明显增强(P<0.05);JNK效应蛋白c-Jun磷酸化蛋白表达水平上调。结论过表达JNK2可以增强SCL-1人皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖能力和抗凋亡能力。
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