从泰山土壤中分离获得一株拮抗细菌(菌株编号:C332),前期研究结果表明:该菌株对多种动植物病原真菌具有较强拮抗作用,菌株发酵性状优异,发酵液性质稳定,具有一定的应用前景。本研究对该菌株进行了鉴定,研究了摇瓶发酵产生抗细菌活性物质的最佳发酵配方和条件,对抗细菌活性物质进行了分离纯化,并研究了其部分理化性质。主要研究结果如下。通过菌体形态特征观察、生理生化指标测定、16S rDNA序列及其系统进化树分析,鉴定C332菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank注册,登录号为AY756511。体外拮抗试验表明C332菌株对烟赤星病菌(Alternaria alternata)、茶轮斑病菌(Phyllosticta thesefolia)、棉花立枯病(Rhizoctonia solani)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp. vasinfectum )、大肠杆菌(Escherichia coli)、黑胸败血(Bacillus sp.)等多种植物和动物病原菌具有拮抗作用。采用单次单因子法(one factor at a time)对C332菌株发酵产生抗细菌活性物质的培养基配方及发酵条件进行了研究,进一步采用响应面法对发酵培养基进行了优化,首先用一次回归试验设计对培养基组分进行了评价,筛选出影响产量的三个主要因素:牛肉膏、葡萄糖和土豆。再根据试验结果进行最陡爬坡试验逼近最大产量区域,最后用中心组合设计和响应面分析确定主要影响因子的最佳浓度。优化后最佳发酵条件:初始pH5.0,装液量50mL,接种量2%,发酵温度30℃,种龄20h。最佳培养基配方:葡萄糖0.99%,牛肉膏1.4%,土豆4.0%,MgSO4 0.3%,KH2PO4 0.2%,CaCO3 0.15%。运用该配方和条件进行摇瓶发酵,发酵液效价比初始培养基提高2.08倍。通过20%~40%硫酸铵分级盐析、CM-Sepharose离子交换柱层析、Sephadex G-50柱层析、高效液相色谱以及薄层层析对C332菌株产生的抗细菌活性物质进行了分离纯化,通过硅胶G薄板层析(TLC)最终将抗菌物质分离为Rf值分别为0.39,0.53,0.72的3种有效成分。3个有效组分在单组分状态下表现不稳定。抗细菌活性物质粗物在pH2.5~10.0稳定,耐高温,对蛋白酶敏感,对紫外线不敏感,对家蚕安全无毒。