疼痛是子宫内膜异位症(以下简称内异症)患者最突出、最典型的症状之一,其主要表现为月经期或经行前后出现的腹痛、腰骶部疼痛,甚至剧痛难忍,如此影响广大育龄妇女生活质量及身心健康的疾病,其疼痛机制尚不明确。近年来,对疼痛产生的机制进行了大量研究,最近研究较多的方向是子宫内膜异位病灶内的感觉神经纤维。研究认为,子宫内膜异位症的疼痛症状与病灶内感觉神经Aδ,感觉纤维C的分布异常增多相关。至于导致这种神经纤维分布增多现象的原因,尚缺乏相关报道。国外有报道内异症疼痛的神经解剖机制,但未对转换刺激的神经递质进行系统研究,国内对内异症疼痛机制研究目前还是空白。与痛觉感受有关的致痛物质主要是神经生长因子(nerve growth facter,NGF)、白介素及肿瘤坏死因子α等。NGF属于神经营养因子家族,是促进神经元存活的一类蛋白。近年来发现NGF与其受体结合后诱导自磷酸化作用,引发多种生物效应,其中包括诱导肥大细胞释放5-羟色胺,导致痛觉过敏,在调节神经病理性和非神经病理性疼痛中有着重要的作用。不同类型的内异灶与疼痛的关系不同,其中卵巢内膜异位囊肿与疼痛关系不明显,深部侵润型异位灶与痛经、CPP、性交痛以及大便痛都有密切的关系。2005年SCIENCE杂志载文认为内异症疼痛以及对雌激素敏感的机制之一就是异位内膜灶中神经支配的形成,从而对中枢神经元的活性产生广泛和多种的影响。但这些国外研究样本量均不大,研究分组缺乏不同程度疼痛症状之间,以及不同类型内膜异位灶之间的对比,其所得的结论尚未完全统一,还没有深入探讨神经纤维、神经递质以及致痛物质在内异灶中分布的量和质的改变和疼痛程度之间的相关性,并且没有对神经纤维的异常分布进行药物的干预研究。国内目前还没有开展此类的临床基础研究。研究目的1探讨不同类型的内异症病灶中NGF及其受体TrkA、P75的分布和表达的差异,以及与疼痛程度的关系;2探讨内异症痛经患者的在位内膜中是否存在神经生长因子及受体TrkA、P75异常的高表达并进行对比分析,进一步丰富“在位内膜决定论”;3探讨雌、孕激素及GnRHa对体外培养痛经患者在位内膜及正常内膜表达NGF、TrkA及P75NTR的影响。研究方法1免疫组化及免疫荧光双标法检测NGF、TrkA及P75在子宫内膜异位症患者病灶以及在位膜中的表达及共表达;2 Western Blot及RT-PCR法检测NGF、TrkA及P75在子宫内膜异位症患者病灶以及在位膜中的表达;3 Real-timePCR法检测NGF、TrkA及P75在子宫内膜异位症患者病灶以及在位膜中的表达;4体外培养在位内膜及正常内膜,并细胞免疫荧光、流式细胞技术以及RT-PCR法检测NGF、TrkA及P75在子宫内膜异位症患者病灶以及在位膜中的表达;5以不同浓度的雌、孕激素及GnRHa作用于体外培养在位内膜及正常内膜细胞,RT-PCR法检测NGF、TrkA及P75在细胞水平的表达;6同一浓度雌激素作用下,RT-PCR法检测不同时间点NGF、TrkA及P75在细胞水平的表达;7 ElISA法检测子宫内膜异位症患者血清中NGF以及痛觉敏感相关肽(孤啡肽)的表达。结果1内异症患者病灶内的NGF及其受体P75的表达量依次为:宫骶韧带>腹膜>巧囊。TrkA在腹膜中表达最高,其次是宫骶韧带,巧囊表达最少;2宫骶韧带DIE病灶中,中重度痛经组病灶内表达NGF、TrkA及其受体P75较轻度或无痛经症状的宫骶韧带组高,而腹膜及巧囊病灶NGF、TrkA及P75表达量与痛经程度之间无明显相关性;3内异症患者宫骶韧带病灶、腹膜病灶表达NGF、TrkA及P75表达量较非内异症患者高。而巧囊表达NGF及其受体TrkA、P75与非内异症患者比较无显著差异;4重度痛经的患者子宫内膜表达P75较无痛经症状患者及对照组高;5体外培养有痛经症状内异症患者在位内膜基质细胞表达NGF及其受体TrkA较无痛经症状的正常子宫内膜基质细胞高;6体外培养有痛经症状内异症患者在位内膜基质细胞对NGFmRNA及其受体TrkAmRNA、P75mRNA的表达与对照组比较,无显著差异。提示在位内膜基质细胞可能在转录后水平受到影响,从而增加了蛋白的表达;7在位子宫内膜基质细胞及正常内膜基质细胞在不同浓度的雌、孕激素作用后表达NGFmRNA、TrkAmRNA及P75mRNA,结果显示干预前后无明显变化;8同一浓度的17β雌二醇干预内异症患者在位内膜及正常内膜基质细胞,药物作用后24小时以内,NGFmRNA、的表达从8小时至24小时期间开始有上升趋势,而对照组有下调趋势;9不同浓度的GnRHa的作用下,异位子宫内膜细胞表达NGFmRNA、TrkAmRNA、P75mRNA明显下降,有显著性差异。而正常的子宫内膜基质细胞,在GnRHa干预后,NGFmRNA、TrkAmRNA、P75mRNA表达的无明显变化。内异症组与对照组比较,差异有显著性;10子宫内膜异位症痛经患者血浆内孤啡肽含量较高,而无痛经患者较低,对照组则更低,NGF在血清中表达趋势同OFQ,且不随月经周期变而改变;11 GnRHa治疗史患者血清内NGF在用药后明显下降,较痛经患者低,甚至较正常人更低,提示使用GnRHa亦可以抑制外周血中的NGF的表达。GnRHa治疗史患者血清OFQ的表达亦较未用药组低。结论1本课题首次研究了常见的几种内异症病灶表达NGF、TrkA及P75表达。发现宫骶韧带DIE内致痛物质增加,重度疼痛较无或轻度疼痛患高。提示了宫骶韧带DIE患者的疼痛可能与NGF及其受体TrkA及P75的表达有关。腹膜与巧囊病灶内表达NGF、TrkA以及P75与疼痛程度无明显相关性,提示腹膜及巧囊患者的疼痛可能与NGF及其受体的表达无关;2体外培养痛经患者在位内膜基质细胞表达NGF及其受体TrkA增加,提示内异症痛经患者在位内膜异常,进一步丰富了“在位内膜决定论”;3体外培养在位子宫内膜基质细胞及正常内膜基质细胞在不同浓度的雌、孕激素作用24小时后表达NGFmRNA、TrkAmRNA及P75mRNA显示干预前后无明显变化,提示NGF在子宫内膜基质细胞的表达可能通过雌、孕激素以外的其他途径产生;4 GnRHa能明显下调内异症患者在位内膜基质细胞表达NGFmRNA、TrkAmRNA及P75mRNA,这可能与GnRHa治疗内异症疼痛的多重机制相关;5血清中NGF及痛觉敏感相关肽在疼痛患者中有增高趋势,提示疼痛患者外周血内可伴有致痛物质的升高,为内异症疼痛的疗效评价提供了新的靶点;6有GnRHa用药史的患者血清内致痛物质下降,说明GnRHa不仅从下丘脑、垂体、性腺轴水平抑制内异症病灶的生长,而且从外周水平下调了患者体内与疼痛相关的因子表达。