拟南芥SMC5/6复合体中ASAP1-SNI1复合物的结构生物学初探

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SMC5/6复合物是广泛存在于生物体中的一种蛋白复合物,研究表明SMC5/6复合物与同源重组修复,核糖体DNA及异染色质的结构维持,端粒延伸和染色质的拓扑结构调节密切相关。SMC5/6复合物由两种SMC蛋白,SMC5和SMC6,和多个Nse亚基组成。大部分生物体内只发现Nse1-Nse4这4种亚基。近年来相继在在酵母、拟南芥和人中发现了两个新的Nse亚基,Nse5和Nse6,并发现它们调控SMC5/6与DNA损伤位点的结合并进行DNA损伤修复。在拟南芥中,Nse5和Nse6的同源蛋白分别为ASAP1和SNI1。此前有研究表明SNI1是植物获得性免疫的负调控因子,能够抑制防卫基因的表达。SNI1的双重身份表明植物的免疫反应和DNA的损伤修复存在某种关联,而SNI1在其中可能发挥着十分关键的作用。为了揭示其中的分子机理,我们决定对ASAP1-SNI1复合物进行结构生物学研究。  本研究对ASAP1-SNI1复合物的结构生物学研究进行了初步探索:1)我们尝试在大肠杆菌中单独重组表达ASAP1和SNI1,但两者均在包涵体中且难以纯化;2)我们将SNI1与ASAP1进行共表达,成功纯化出性质良好均一的ASAP1-SNI1复合物蛋白,验证了ASAP1和SNI1的直接相互作用;3)我们对ASAPI和SNI1进行约200多种截短体蛋白筛选,确定了它们的相互作用区域,并进行约24000多个晶体条件筛选,遗憾的是暂未获得晶体。  本研究中虽然未能获取ASAP1-SNI1复合物的晶体,但对ASAP1-SNI1的表达条件进行了优化,并确定了ASAP1-SNI1复合物的互作区域,为后续开展ASAP1-SNI1复合物结构与功能研究提供了一定基础。
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