近年来，环境雌激素对野生生物和人类产生的危害引起了人们的广泛关注。目前，鱼类卵黄原蛋白(Vitellogenin, Vtg)作为筛选环境雌激素的特异性生物标志物，已经得到广泛应用。研究表明，鱼类Vtg在纯化过程中易发生降解，且温度影响尤为显著，这对Vtg的检测与纯化制备十分不利。Vtg在卵巢中酶解成三种主要的卵黄蛋白，其中卵黄脂磷蛋白(Lipovitellin, Lv)和β’-组分(β’-component,β’-c)与Vtg具有相同的免疫原性。Lv因在鱼卵巢中含量丰富，稳定性较好，已被研究者制备多克隆抗血清，用于血浆Vtg的检测。本研究以金鱼卵巢组织作为实验材料，分离纯化出金鱼Lv，研究了其基本性质和热稳定性，制备了鼠抗金鱼Lv多克隆抗血清，分析了金鱼Vtg与Lv之间的免疫原性，并且利用Westernblot技术分析了金鱼Lv抗血清与鲤鱼、鲫鱼、斑马鱼、美国红鱼、石鲽等Vtg的免疫交叉反应。研究结果表明：将金鱼卵匀浆，经硫酸铵沉淀盐析，制备金鱼卵匀浆提取液，Native-PAGE显示，提取液中含有丰富的卵黄蛋白。经凝胶过滤和离子交换两步层析法进一步分离、纯化，得到纯的卵黄蛋白。分别利用苏丹黑、Schiff试剂和甲基绿进行染色，结果显示该蛋白是一种含有脂、糖、磷的蛋白；在非变性条件下其分子量约为385kDa，SDS变性电泳显示其单体分子量约为112kDa；氨基酸组成分析表明，金鱼Lv中Glu(12.28)、Ala(10.84%)、Val(10.37)、Leu(11.02%)、Asp(6.56%)的含量较高，这5种氨基酸总和占氨基酸总量的51.07%，His(2.53)和Met(2.71)的含量则较低，与哲罗鱼和虹鳟鱼Lv的氨基酸组成相似；与金鱼Vtg相比，Lv中Ser的含量减少了近50%，且两者都不含有Cys。这些结果证明纯化的蛋白为金鱼Lv。利用纯化的金鱼Lv腹腔注射小白鼠进行免疫，免疫周期为6周。采用免疫双扩散法，测得制备的鼠抗金鱼Lv多克隆抗血清效价为1:32；免疫双扩散还发现，Lv多克隆抗血清可以与雌鱼血浆反应，而与雄鱼血浆不发生反应，证明Lv为雌性特异性蛋白；免疫电泳实验表明Lv抗血清可以与Vtg发生免疫反应，仅形成一条免疫沉淀线，说明两者具有相同的免疫原性；Western blot检测显示抗血清特异性较好，在1:500倍稀释条件下对金鱼Vtg的最低检出限为1.1μg/mL。金鱼Lv多克隆抗血清能够与多种鱼的Vtg发生交叉反应，从而扩大了其应用范围。Western blot表明，金鱼Lv抗血清能够用于检测鲤鱼、鲫鱼血浆中的Vtg，它们都含有分子量为118和107kDa的两条主带，在斑马鱼匀浆液稀释200倍的情况下，仍能检测到分子量约为107kDa和99kDa的两条带；当美国红鱼Vtg浓度为1.1μg/mL时，该抗血清依然可能检测到多条带。此外，该抗血清还能与E2诱导下雄性石鲽的血浆表现出很好的交叉反应。可见，金鱼Lv抗血清可以用于环境雌激素的检测，并且具有广泛的应用范围。