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桑葚是荨麻目桑科植物桑树(Morus alba L.)的果实。其营养丰富,富含活性蛋白、多种维生素、有机酸、游离氨基酸、矿物质及微量元素等营养成分,还含有花青素、活性多糖、黄酮等功能因子,具有很强的生物保健功能。我国桑葚资源非常丰富,由于其具有成熟快、采收时间短、鲜果货架期短、极易腐烂等特点,目前,除了少量用于鲜食外,已有部分加工成桑葚果汁、果醋、果酒、果酱、果脯等产品。但是对于桑葚加工后的副产物——桑葚籽,研究较少,目前仅仅用于饲料,其中所含有的丰富的蛋白质、油脂、多酚、黄酮等成分,具有极高的开发利用价值,也随同其他皮渣一起作为饲料被利用,造成了资源的极度浪费。本文以桑葚酒渣中的桑葚籽为原料,系统研究了桑葚籽中黄酮类物质的高效提取分离纯化技术,分析了黄酮的体外抗氧化活性及其抑菌能力,并进一步研究了桑葚籽黄酮对肝癌细胞HepG2细胞的生长抑制作用及促进细胞氧化损伤、凋亡的作用。其主要研究内容与结果如下:(1)通过单因素试验和响应面分析,确定超声复合酶法提取黄酮的最佳工艺条件为:酶添加量0.32 mg/mL、酶解温度55℃、酶解时间75 min、超声时间22 min,在此条件下黄酮得率为5.32 mg/g。(2)通过比较5种大孔树脂对桑葚籽黄酮的吸附和解析效果,确定HPD 300大孔树脂为最佳的纯化树脂。其最佳纯化工艺为:黄酮提取液浓度为0.5 mg/mL,pH值为5.0,上样流速1.0 mL/min,洗脱液用体积分数为70%的乙醇,洗脱速率为1.0 mL/min。当洗脱体积为90 mL时,解吸率最大。经HPD 300大孔树脂纯化后,黄酮含量及总抗氧化能力分别是为纯化前的2.28倍和2.80倍。(3)桑葚籽黄酮的抗氧化活性结果显示,黄酮具有较强的抗氧化能力,当浓度为1.50 mg/mL时,黄酮对DPPH自由基的清除率为89.58%;当样品浓度为1.20 mg/mL时,黄酮对羟自由基的抑制率分别为88.75%;黄酮抗超氧阴离子活力单位能达到258.88U/L,其基本接近相同浓度下维生素C对自由基的清除率。通过牛津杯法分析其抑菌活性,发现其抑制能力大小依次为:沙门氏菌>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌>酵母菌。(4)采用MTT法检测桑葚籽黄酮对HepG2细胞的生长抑制作用,结果表明,桑葚籽黄酮能够抑制细胞的生长,且呈一定的剂量、时间效应。当黄酮浓度为500μg/mL时,在24 h、48 h、72 h分别检测其细胞抑制率,依次为57.05%、68.39%、71.54%。(5)通过流式细胞仪对细胞周期进行分析发现,桑葚籽黄酮能够将细胞阻滞在G0/G1期,有效的减少蛋白质的生成,抑制细胞分裂,减少新细胞生成。由对于细胞凋亡的分析可知,早期凋亡细胞呈剂量依赖性增加。当黄酮浓度较低(c≤200μg/mL)时,早期凋亡的细胞与晚期凋亡的细胞差别较小,当浓度较高时,早期凋亡的细胞远远大于晚期凋亡的细胞比例,细胞总凋亡率显著增大。LDH、SOD和MDA的试验结果说明,经过桑葚籽黄酮处理后,HepG2细胞内LDH和MDA含量明显增大,而SOD水平由于ROS的减少而明显降低。所以桑葚籽黄酮能够明显抑制HepG2细胞生长,造成细胞氧化损伤。