目的：近年来，糖尿病以及相关的代谢性疾病的患病率和发病率逐年上升，已成为全球性健康问题，但是医疗领域仍然缺少有效且安全的治疗手段。成纤维细胞生长因子19（fibroblastgrowthfactor19，FGF19）是FGF家族蛋白中较为特殊的成员。作为内分泌亚家族成员，FGF19在葡萄糖、胆汁酸和能量代谢中发挥着重要的调控作用。然而长期注射FGF19或者慢病毒过表达FGF19可能诱发肝脏肿瘤形成，这制约了FGF19进一步的临床转化。本文从FGF19信号传导特征以及结构层面出发，通过设计肝素结合位点敲除的FGF19△HBS，以削弱其下游信号强度，从而分离了FGF19的代谢活性和促肿瘤活性，得到安全有效的FGF19类似物。
　　方法：（1）FGF19?HBS和FGF19WT的表达以及纯化。将构建的FGF19?HBS重组表达质粒转化到感受态细胞BL21（DE3）中，在37℃培养至OD600达到0.8-1.0；加入1mM异丙基-L-硫代-β-吡喃葡萄糖苷（IPTG），诱导大肠杆菌表达约4h；用9000rpm高速离心机收集所有菌体，超声破碎细菌；超高速离心收集沉淀后，经变性和蛋白复性恢复目的蛋白的正确构象；通过Ni柱亲和色谱柱和分子排阻色谱纯化得到纯度较高的目的蛋白（纯度大于98%）。（2）通过表面离子体共振（Surfaceplasmonresonance，SPR）测试对比FGF19WT和FGF19?HBS的受体（FGFR）及肝素（heparin）的亲和性。（3）利用邻位连接技术（PLA）对比FGF19WT和FGF19?HBS诱导受体二聚化程度的差异；以大鼠肝癌细胞系H4IIE为实验对象，利用蛋白免疫印迹对比两者激活下游信号强度的差异；进一步，以正常C57BL/6J小鼠为模型，单次给药2小时后取肝脏，通过蛋白免疫印迹的方法检测FGF19WT和FGF19?HBS在体内激活下游信号强弱。（4）以db/db小鼠为动物模型，对比生理盐水、FGF19WT和FGF19?HBS的慢性降血糖效果，并在慢性给药1个月对比FGF19WT和FGF19?HBS对db/db小鼠的糖耐量的改善作用；单次给予C57BL/6J小鼠以生理盐水、FGF19WT和FGF19?HBS，给药4小时后取肝脏，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测胆汁酸合成的关键酶（CYP7A1）的mRNA水平；以db/db小鼠为模型，长期给药1个月后，利用HPLC-MS/MS的方法分析肝脏内主要胆汁酸的水平。（5）通过免疫印迹和免疫组化分析各组慢性给药后db/db小鼠肝脏中PCNA和Ki67蛋白水平以及CCNA2、AFP以及EGFR的mRNA水平的差异，对比FGF19WT和FGF19?HBS两者诱导肝细胞增殖活性。（6）腺相关病毒（AAV）高表达FGF19WT和FGF19?HBS对db/db小鼠糖代谢和糖耐量的改善作用，并分析肝脏肿瘤以及肝脏中PCNA、ki67和谷氨酰胺合成酶（GS）三个与肝脏增殖和肿瘤形成密切相关的指标。
　　结果：通过体外试验，我们证明相比于FGF19WT，FGF19?HBS和heparin结合能力降低，从而导致FGFR二聚化程度下降、下游信号减弱。通过动物试验我们发现，相比于FGF19WT，FGF19?HBS能够在保留葡萄糖和胆汁酸代谢调节的同时，其促增殖活性明显下降。通过AAV小鼠试验，我们进一步证明了FGF19?HBS确实是一种保留代谢活性而去除肿瘤毒性的FGF19类药物。