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目的建立PKH26、DAPI标记骨髓间质干细胞(mesenchymalstem cell，MSC)的方法，并探讨标记MSC的基本生物学活性；SD大鼠经50％的甘油肌内注射建立大鼠急性肾功能衰竭(acute renalfailure，ARF)模型，评价经尾静脉注射的MSC对大鼠ARF的治疗效果及体内外初步探讨其可能机制。方法MSC按PKH26、DAPI标记程序进行标记后培养，采用激光共聚焦显微镜(confocol)、流式细胞分析仪(FCM)等观察细胞生长状态和荧光标记活性变化；应用RT-PCR检测标记后MSC的nucleostemin及Bmi-1基因的表达；选用碱性磷酸酶(ALP)染色、Von kossa染色及骨形成蛋白3(BMP3)基因表达分析等技术，观察标记后MSC体外分化成骨细胞的特性；SD大鼠经50％的甘油肌内注射建立大鼠ARF模型，尾静脉注射MSC，综合运用临床生物化学、分子生物学、免疫组织化学、病理学、荧光原位杂交(FISH)等技术，评价MSC的治疗效果并找寻修复肾损伤的机制。体外利用Transwell培养板将大鼠MSC与受损肾组织共培养，运用confocol、RT-PCR、巢式PCR、荧光定量PCR鉴定细胞是否能分化为肾小管样上皮细胞，进一步佐证MSC的治疗修复机制。结果PKH26标记后细胞呈红色荧光，DAPI标记的细胞核呈蓝色荧光，荧光的强度随着荧光染料浓度的增加而递增，并与传代时间和代数相关；标记后细胞生长状态良好，基本生长特性如传代培养和生长曲线无明显改变；细胞nucleostemin及Bmi-1基因表达未见改变；标记MSC诱导后ALP、Von kossa染色阳性，呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征，并表达BMP3基因；成功建立大鼠ARF模型，ARF大鼠肾组织内具有较多的外源MSC，其他组织如心、肝、肺、脑也可见少量的外源MSC；利用胎儿MSC进行的定位实验中，在大鼠的心、肝及不同肾脏部位扩增出人17α卫星DNA序列。FISH实验显示大鼠冰冻肾脏切片中可见人源性细胞。MSC实验组大鼠血清肌酐、尿素氮下降水平较对照组具有明显的差异(P＜0.05)。实验组大鼠肾脏恢复情况较对照组有明显改善。体外共培养后，大鼠MSC形态由长梭形变为圆形，并且高表达上皮细胞特异性基因CK18和肾小管上皮细胞特异性基因AQP1。结论PKH26、DAPI可稳定标记大鼠骨髓MSC并能传代培养，标记后细胞形态、生长活力及多向分化潜能等无明显影响，该技术可用于追踪MSC转归、可塑性及干细胞移植方面的实验研究；外源MSC体内能够归巢到受损肾脏，并能有效地治疗大鼠ARF。体外受损肾组织能诱导大鼠MSC分化为肾小管样上皮细胞。本研究为ARF的有效治疗和肾损伤的修复等提供新的实验模型和依据，为临床治疗肾脏疾病开辟一条新途径。