本文分为以下几个部分进行探讨：　　第一部分 双酚A与多囊卵巢综合征高雄症的发生　　目的:明确多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢微环境双酚A(BPA)的含量，阐明其与卵泡液中高雄之间的关系;研究BPA诱导的大鼠模型成年后其PCOS表型尤其是高雄的发生，明确BPA与高雄症发生的关系。　　材料与方法:回顾性分析2005年1月-2012年6月于浙江大学医学院附属妇产科医院生殖中心行体外受精(IVF)治疗的PCOS患者及因输卵管因素不孕行IVF治疗患者的临床资料，比较两组间的临床特点及妊娠结局;招募2012年9月-2013年5月于浙江大学医学院附属妇产科医院生殖中心行IVF治疗的PCOS不孕患者51人（PCOS组）与输卵管因素不孕患者49人（对照组），使用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)检测患者卵泡液中的总睾酮(TT)，雄烯二酮(A)，性激素结合球蛋白(SHBG)的含量，利用高效液相色谱-串联质谱(HPLC/MS/MS)检测卵泡液中BPA的水平。建立BPA诱导PCOS大鼠模型，在其第6-8周观察其动情周期，从而监测排卵情况，观察性成熟期大鼠卵巢形态，外周血中雄激素等内分泌状态的异常。　　结果:PCOS组患者较对照组表现为内分泌紊乱，其中最为明显的是高雄激素状态;PCOS患者胚胎移植取消率显著增高，临床妊娠率显著降低，流产率显著增加。PCOS患者卵泡液中的TT，A，游离雄激素指数(FAI)与BPA水平明显升高;且在BPA较高的PCOS病人中，其卵泡液中TT，A，FAI含量也显著高于非高BPA的PCOS病人;卵泡液中BPA含量与TT，A，FAI在所有病人，对照组及PCOS组均呈现正相关关系;其中PCOS组中的相关系数显著高于对照组的相关系数;BPA诱导的大鼠模型表现为持续动情，外周血中TT，LH/FSH比值增高，卵巢发生多囊样改变。　　结论:PCOS患者表现为显著的高雄激素状态，其妊娠结局也明显劣于因输卵管因素行助孕治疗的女性;PCOS患者卵泡液中BPA含量显著高于对照组，且高BPA与高雄激素状态呈显著的正相关关系;高BPA暴露成功诱导大鼠发生PCOS表型。　　第二部分 双酚A通过雄激素受体抑制颗粒细胞中芳香化酶的转录及功能从而引起高雄的机制研究　　目的:利用人原代培养的颗粒细胞体外研究高BPA暴露与高雄发生之间的关系，并从转录水平阐明其中机制。　　材料与方法:体外使用BPA刺激原代培养的颗粒细胞，使用实时定量PCR和Western Blot的方法检测细胞中芳香化酶(P450)的表达，利用ELISA检测细胞培养基上清中睾酮(T)、A、雌二醇(E2)及雌酮(E1)的含量以检测P450的功能;分别进行雌激素受体(ER)/雄激素受体(AR)阻断实验和AR特异性siRNA干扰试验，检测BPA影响P450可能作用的受体;利用工具细胞HEK293FT，体外过表达雄激素受体(AR)表达质粒和带有雄激素反应元件（ARE）的荧光素酶报告质粒进行染色质免疫共沉淀及荧光素酶报告实验研究BPA作用机制，利用腺病毒AR过表达载体感染原代培养的颗粒细胞，验证BPA影响颗粒细胞功能的机制。　　结果:体外BPA刺激可浓度依赖地抑制P450的表达和功能，且该抑制作用可以被AR阻断剂flutamide及AR-siRNA所阻断。体外荧光素酶报告实验证实BPA可以浓度依赖地抑制T所诱导ARE下游的荧光素酶表达，染色质免疫共沉淀实验证实BPA并不影响AR的转录活性，但是BPA可以浓度依赖地抑制T激活的AR转录及下游芳香化酶的转录。　　结论:卵巢高BPA水平可抑制P450转录及功能，从而雄激素代谢障碍，最终引起PCOS高雄的发生;BPA通过干扰雄激素诱导的AR转录激活，从而抑制P450的转录。　　第三部分 高BPA暴露引起颗粒细胞转录组改变及DNA甲基化异常在高雄发生的机制研究　　目的:明确高BPA暴露的颗粒细胞中基因的差异表达，及涉及的相关通路和功能;在PCOS病人的颗粒细胞中验证与甾体激素合成及脂质代谢相关基因的表达与转录组结果是否一致;检测PCOS颗粒细胞中整体甲基化程度的改变及与甾体激素合成相关基因启动子区域的甲基化修饰异常，揭示异常甲基化在PCOS高雄发生中的作用。　　材料与方法:使用Illumina Hiseq2000分别针对3名卵泡液中高BPA水平的PCOS患者及对照组的颗粒细胞进行转录组测序并进行下游的生物信息学分析;共招募PCOS不孕患者71人与输卵管因素不孕患者50人，收集其卵泡液，颗粒细胞。使用ELISA测定其卵泡液中TT，SHBG，FAI含量，运用实时定量PCR技术扩大样本量对转录组结果进行验证;针对5-甲基胞嘧啶(5-mC)含量测定两组病人颗粒细胞中DNA整体甲基化水平;利用MassARRAYTM EpiTYPER DNA甲基化定量分析技术分析特异基因某个或某些特定CpG位点的甲基化水平。　　结果:转录组结果显示，与对照组相比92个基因在高BPA水平的PCOS的颗粒细胞中差异表达(fold change≥1.5，P＜0.05，false discovery rate＜0.05);针对此92个差异基因的生物信息学分析得到这些差异基因主要与免疫炎症疾病，生殖系统疾病，内分泌系统疾病，代谢性疾病相关;涉及的功能主要有细胞死亡和存活，细胞间通讯，细胞运动，脂质代谢等相关;涉及心血管系统、胚胎、内分泌系统等的发育和功能;下游的分析发现甾体激素的合成及脂质代谢功能受激活。实时定量PCR与转录组结果基本一致;PCOS病人的颗粒细胞的DNA整体甲基化水平显著降低（4.44±0.65％ vs.6.07±0.72％，P＜0.05）;MassARRAYTM EpiTYPER DNA结果显示有差异的与甾体激素合成及脂质代谢相关基因特定甲基化位点的甲基化程度呈现不同程度的降低，并与基因的表达水平呈现不同程度的负相关。　　结论:高BPA暴露的颗粒细中甾体激素的合成功能显著激活，提示与高雄激素血症的发生发展显著相关;总体水平或基因特异性的DNA异常甲基化可部分解释PCOS病人颗粒细胞异常的基因表达以及随之而来的高雄。我们的结果提示DNA异常甲基化可能是PCOS发生的重要原因。