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脊椎动物中,白细胞介素10(IL-10)是一种抗炎因子,在广泛的免疫反应中起抑制作用。白介素1受体相关激酶1(IRAK1)参与IL-1R/TLR炎症信号的转导,在调节机体的自身免疫过程有重要作用。信号转导和转录激活子3(STAT3)具有包括参与炎症、肿瘤发生、代谢紊乱和免疫反应等过程的多种生物学功能。在脂多糖(LPS)刺激下,哺乳类IRAK1能够易位至细胞核与STAT3形成二聚体并调控IL-10基因的转录。但是关于鱼类中IRAK1和STAT3之间的关系鲜有报道。我们为了研究鱼类的抗炎作用,首先根据已经上传的相关序列扩增并鉴定了草鱼IRAK1(CiIRAK1)和STAT3(CiSTAT3)基因的完整开放阅读框。用LPS刺激草鱼肾细胞(CIK细胞)后发现CiIRAK1的核酸表达水平在6 h-24 h均有显著上调,且在24 h时达到最高;而CiSTAT3的表达量在6 h-12 h有上调,且在6 h时达到最高。这一实验结果说明了 CiIRAK1和CiSTAT3都能够响应LPS刺激,它们可能参与LPS-TLR4通路信号的传导。在对CiIRAK1和CiSTAT3的亚细胞定位分析中,我们发现在没有任何刺激的情况下,CiIRAK1只分布于细胞质中,而在经过LPS刺激后,有一部分CiIRAK1进入细胞核;在有或没有LPS刺激的条件下,CiSTAT3在细胞质和细胞核中都能够被检测到。免疫共沉淀分析结果也显示,在LPS刺激下,CiIRAK1与CiSTAT3能够相互作用。而在没有LPS刺激的条件下,CiIRAK1和CiSTAT3则不会发生相互作用。随后的免疫荧光共定位实验进一步证明了在LPS刺激下CiIRAK1和CiSTAT3在细胞核中发生相互作用。为了探究CiIRAK1和CiSTAT3对IL-10的转录调控作用,首先,我们将重组质粒 IRAK1-pcDNA3.1 和 STAT3-pcDNA3.1 分别转染到 CIK 细胞中,Q-PCR实验结果显示,在过表达CiIRAK1和CiSTAT3的条件下CiIL-10的表达量有显著上调;反之,在敲降CiIRAK1和CiSTAT3的条件下CiIL-10的表达量有显著下调;最后,在单独过表达IRAK1-pcDNA3.1或STAT3-pcDNA3.1以及同时过表达IRAK1-pcDNA3.1和STAT3-pcDNA3.1的实验中,我们发现CiIRAK1和CiSTAT3均能够增强CiIL-10启动子活性,并且与单独过表达相比,共同过表达CiIRAK1和CiSTAT3时,更加激活了CiIL-10的启动子活性。