香茶菜为多来源药材,收载于多省地方标准。是胡庆余堂药业公司独家产品胃复春片的主要原料。本课题对香茶菜药材资源及使用的情况进行调研,根据调研结果以目前资源最多、最常用的毛叶香茶菜Rabdosia japonica(Burm.f.)Hara为主要研究对象,采用现代分析技术,分别从化学成分研究、定量分析、指纹图谱、定性鉴别等方面对毛叶香茶菜香茶菜药进行成分分析,建立质量控制方法,以保证药材及制剂质量的稳定和可控。目的(1)对香茶菜药材资源及使用情况进行调研,为胃复春片的原料资源进行考察;(2)对毛叶香茶菜药材的化学成分进行研究;(3)建立毛叶香茶菜药材多指标的定量分析方法;(4)建立毛叶香茶菜的HPLC指纹图谱方法;(5)建立毛叶香茶菜药材薄层色谱鉴别方法;(6)毛叶香茶菜常规项检查以及农药残留、重金属测定。方法(1)对香茶菜的资源分布、使用情况进行实地考察。(2)对毛叶香茶菜中酚酸、二萜类进行成分研究。采用凝胶色谱柱层析、硅胶柱层析、制备液相等多种分离手段,对毛叶香茶菜中的特征性成分进行提取、分离、纯化和鉴定。(3)采用液相色谱法,建立同时测定毛叶香茶菜中Rabdosiin、Epinodosin、芦丁、迷迭香酸、Lasiodonin和冬凌草甲素的含量的HPLC方法,并进行方法学验证,并比较不同产地毛叶香茶菜药材所含成分的种类及含量差异。(4)采用液相色谱法,研究建立毛叶香茶菜HPLC指纹图谱,并进行方法学验证。同时测定32批不同产地毛叶香茶菜药材的指纹图谱,比较其相似度。并以此方法比较不同来源香茶菜药材的相似度(5)采用TLC,建立毛叶香茶菜药材中二萜类成分的薄层鉴别方法。(6)采用LC-MS/MS农药多残留检测方法,测定毛叶香茶菜中农药残留量;采用ICP-MS方法测定毛叶香茶菜中重金属含量。结果(1)目前香茶菜药材的资源与使用最多的为毛叶香茶菜。香茶菜Ra amethystoides(Benth.)Hara资源已很少,不能成为商品。大萼香茶菜Rabdosia macrocalyx(Dunn)Hara资源已很少,未能收集到。蓝萼香茶菜Rabdosia Japonica(Burm.f.)Hara var.Japonica也有商品资源流通,但不是主要来源。毛叶香茶菜是胃复春片主要原料。(2)从毛叶香茶菜叶中分离并鉴定出三种二萜类成分:Epinodosin(表诺多素)、Lasiodonin(拉西多宁)和冬凌草甲素,首次从该植物茎中分离并鉴定出酚酸类成分:Rabdosiin;此外,确证了毛叶香茶菜中还含有迷迭香酸和芦丁。(3)首次建立了同时测定毛叶香茶菜中Rabdosiin、Epinodosin、芦丁、迷迭香酸、Lasiodonin和冬凌草甲素的HPLC含量测定方法,并经过方法学验证,回收率分别为 100.36%、94.31%、103.42%、102.30%、92.93%、98.71%,RSD%分别为 0.61%、1.69%、1.43%、0.92%、2.08%、0.27%,线性、重复性、稳定性、耐用性均符合要求。通过对不同产地毛叶香茶菜根、茎、叶样品的测定,发现叶主要含Epinodosin、Lasiodonin和冬凌草甲素等二萜类化合物以及迷迭香酸、Rabdosiin等酚酸类成分,根和茎中主要含Rabdosiin和迷迭香酸等酚酸类成分,几乎不含二萜类成分。不同产地毛叶香茶菜中迷迭香酸和冬凌草甲素含量差别较大。(4)首次建立了毛叶香茶菜的HPLC指纹图谱方法,32批不同产地的毛叶香茶菜有12个共有峰,指认了其中的六个,分别为Rabdosiin、芦丁、迷迭香酸、Epinodosin、Lasiodonin和冬凌草甲素,其中28批相似度均在0.70以上,4批相似度低于0.70。以毛叶香茶菜对照指纹图谱比较不同来源的香茶菜药材,结果蓝萼香茶菜平均相似度为0.656,香茶菜Rabdosia amethystoides平均相似度为0.142。(5)首次建立了毛叶香茶菜中二萜类成分的薄层鉴别方法,结果Rf值合适,斑点清晰,具有专属性。(6)测定了 12批毛叶香茶菜中农药残留量,结果共有8批样品检测出农药,共检测出7种农药,但均未超过限量要求;测定了 32批毛叶香茶菜中铅、镉、汞、砷、铜等重金属的含量,结果有名批药材铅超标、1批药材铜超标、1批药材镉超标。结论(1)明确了目前香茶菜药材的主要产地和来源,对资源的开发利用有一定指导意义,为药材标准中来源的修订提供依据。(2)本课题通过对毛叶香茶菜化学成分的分离鉴定,明确了毛叶香茶菜药材主要含酚酸类成分和二萜类成分,为香茶菜药材质量控制提供检测指标,为活性成分进一步探索研究提供物质基础。(3)建立毛叶香茶菜指纹图谱、含量测定、薄层鉴别方法,为毛叶香茶菜药材提供了质量控制方法,保证了药材的质量稳定可控。(4)测定了毛叶香茶菜中农药残留和重金属的含量,为保障人民用药安全提供了依据。