全细胞记录观察培养嗅球M/T细胞的电生理特性

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cdp850911
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嗅觉功能对动物和人类的正常生理活动具有重要作用。嗅觉过程是由嗅觉神经元(嗅上皮)把化学刺激转化成电信号,然后嗅球主神经元即M/T细胞对电信号进行初步的分析整合,再把电信号传递到嗅中枢。嗅觉系统各级神经元具有不同的生理功能。嗅觉神经元的作用是把化学信号转化成电信号,嗅球M/T细胞的功能是初步分析、整合并传递电信号,嗅中枢的作用是对电信号进行高级归纳分析。本文实验内容是研究嗅球M/T细胞的电生理特性,主要观察它的膜被动电特性和电压依赖性离子通道的特点。本文实验目的是①建立新生大鼠嗅球神元的原代培养方法,根据培养M/T细胞的大小、突起长短和通道电流的大小,明确这种培养细胞是否适合于Axopatch-1D膜片钳放大器做全细胞记录②比较全细胞记录和微电极记录M/T细胞的膜被动电特性的差异③明确培养嗅球M/T细胞存在的电压依赖性离子通道的种类及其动力学和药物特性④根据M/T细胞的电生理特性推测其电活动的某些特点,从而有助于了解嗅觉信号在嗅球的传递和整合过程。 本文用新生Wistar大鼠做嗅球神经元原代培养,根据形态和大小选择M/T细胞。采用Axopatch 1-D膜片钳放大器在M/T细胞上做全细胞记录,观察和分析培养10-14天的M/T细胞的膜被动电特性、自发电活动、诱发动作电位和电压依赖性离子通道电流。其结果如下: 1.嗅球神经元的原代培养和M/T细胞的膜被动电特性: 嗅球神经元的原代培养时间最长能持续到28天。培养八天后神经元可从形态和体积大小分为两群,一群数量较少,显锥形、有较长突起、胞体直径大于15微米的M/T细胞,另一群数量较多,显球形或双极形、突起较
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