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伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PrV)引起的家畜和多种野生动物的一种以发热、奇痒、呼吸和神经系统疾病为特征的急性传染病，妊娠母猪可发生死胎和流产，是危害养猪业的一个重要传染病。PrV作为一种疱疹病毒，拥有庞大的基因组和许多非必需区，具有用作表达外源基因的巨大潜力，被认为是理想的活疫苗载体。PrV的胸苷激酶(TK)基因是PrV体外生长和复制的非必需基因，却是病毒神经毒力的必需成分。通过诱变或基因工程技术使TK基因灭活后，病毒的毒力显著降低，但其免疫原性没有改变，因此TK基因是外源基因的理想插入区之一。 本研究以呈gE~-表型的经典弱毒疫苗Bartha-K61株为亲本株，在通用PrV转移载体pBdTK-Uni的基础上，在其多克隆位点中插入由SV40早期启动子控制下的LacZ基因表达盒，同时将下游同源臂增加了一个1.7kb的KpnI片段，使上下游同源臂的长度都超过了1kb，构建了一个新的转移载体pUni-LacZ。该载体与具有高度感染性的Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体加PLUS法共转染Vero细胞，采用甲基纤维素固定病变，X-gal染色，经过10代蓝斑纯化获得了一株稳定表达LacZ基因的gE／TK基因缺失突变株，命名为rPrV-LacZ。通过在LacZ基因表达盒内部设计的一对扩增430bp特异序列引物，对重组病毒每代进行检测，结果每代都能扩增到该片段，说明外源基因在PrV中的遗传性状十分稳定。在不同的细胞上(PK-15、IBRS2、Vero和CEF)对重组病毒的病毒滴度和病变与亲本毒进行比较，未发现显著差异。以上结果表明所构建的具有自主知识产权的通用PrV转移载体pBdTK-Uni是成功的，为利用该载体构建伪狂犬病病毒二价基因工程疫苗提供了技术平台。