模拟水样f2噬菌体浓缩方法的研究

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目的:1实验室自行设计制备反冲超滤装置,探索最优化的实验条件以达到较好浓缩水中大肠杆菌f2噬菌体的效果。2.探索聚乙二醇-氯化钠(PEG-NaCl)法浓缩f2噬菌体的效果及不同聚乙二醇(PEG)浓度对f2噬菌体回收率的影响。  方法:1通过预实验,探索超滤仪器的实际压力适用范围,不同压力下出水率,确定实验用的压力范围。设计三因素三水平的正交实验,调节超滤仪器压力、水样温度及pH三个因素,利用切割分子量为10万dalton,内径为10nm的改性聚氯乙烯(PVC)中空超滤膜富集模拟水样中的大肠杆菌 f2噬菌体,采用双层琼脂平板法测定其回收率。2.将f2噬菌体加入到3%牛肉浸膏溶液中模拟经初次浓缩后的水样,使用PEG-NaCl法对水样进行浓缩,采用双层琼脂平板法测定水样中f2噬菌体含量,比较不同浓度PEG8000对于f2噬菌体的回收率的影响。  结果:1经过正交实验探索优化条件,在压力0.3MP,温度为4℃, pH7.0的条件下,单次不循环f2噬菌体的回收率可达94.6%;10L模拟水样循环浓缩,在压力0.3MP, pH7.0,温度25℃条件下总回收率可达86.3%以上。2.PEG-NaCl法(130g/L PEG8000)的f2噬菌体回收率可达65.3%以上,当PEG8000浓度为40g/L和60g/L时,回收率仅有0.16%和2.64%;而当PEG的浓度在80g/L~200g/L范围内时,各浓度组的平均回收率在70%~90%之间波动;经统计学检验,80g/L~200g/L各组回收率之间无显著性差异,40g/L和60g/L的两组回收率与其他各组间的差异有统计学意义(P<0.001)。  结论:1在可控的压力下,反冲超滤膜过滤装置适用于自然条件的水环境pH、温度,是一种简便可行的水体环境病毒富集装置,加入反冲过程,可有效提高病毒总回收率。2 PEG-NaCl法是一种较为理想的二次浓缩方法,当加入 PEG8000的浓度在80g/L~200g/L时,f2噬菌体的回收率可达70%以上,且在该范围内浓度变化对回收率的影响无显著性差异。
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