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目的: 青光眼(glaucoma)是目前世界范围内不可逆性致盲眼病,其中原发性青光眼病因机制尚未明确,其视野缺损及最终视力丧失的病理学核心为视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的凋亡。抑制RGCs的凋亡,探寻其凋亡的机制成为青光眼研究的热点。目前研究发现,热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)在大鼠青光眼模型的RGCs中高度表达,并在外周血中显现其相应抗体的高表达状态,在原发性青光眼患者外周血中也发现该现象。此外,激活雌激素受体(ER-β)可提高内源性HSP27含量。原发性青光眼患者外周血中HSP27抗体及雌激素的表达状态是否具备特异性,两者之间是否存在一定的相关性及剂量反应关系,目前尚未见报道。本研究试图通过检测原发性青光眼患者外周血血清中HSP27抗体与雌二醇(Estradiol,E2)水平及两者的相关性,探讨其对原发性青光眼发病机制的影响及视神经的保护作用,为临床诊断及治疗提供新的思路。 方法: 1.收集自2016年12月-2017年12月就诊于大连医科大学附属第二医院眼科病房,经眼科系统检查确诊为原发性青光眼患者为实验组,同期入院年龄相关性白内障患者为对照组。保证入组患者均无重大全身系统性疾病及恶性肿瘤,患者知情同意。 2.制备血清及保存:取患者清晨空腹外周静脉血5ml为样本,离心后留取上清液1ml至离心管,-80℃冻存。 3.HSP27抗体含量检测:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测得光密度值(OD值),经与标准曲线对比后计算HSP27抗体含量,以μg/ml为单位。 4.雌二醇(E2)含量检测:应用直接化学发光法,检测相对光单位(RLU),以RLU与患者样本中的E2存在反比关系为基础,计算得患者E2值,以ng/L为单位。 5.统计学方法:采用SPSS24.0统计学软件进行分析,结果以均数±标准差((x)±s)表示。实验组、对照组及各亚组HSP27抗体、E2含量数据,分别应用配对t检验进行比较分析,应用pearson相关分析进行相关性分析。 结果: 1.HSP27抗体含量(μg/ml)比较 (1)原发性青光眼及白内障患者血清中HSP27抗体含量分别为2.3315±0.02556μg/ml和39.59±3.63μg/ml,t值为0.012(t<0.05),差异具有统计学意义; (2)原发性开角型及闭角型青光眼患者,血清中HSP27抗体含量分别为2.30528±0.03011μg/ml和2.33070±0.0465μg/ml,t值为0.075(t>0.05),差异无统计学意义;原发性青光眼患者血清中HSP27抗体明显高于白内障患者,但两种类型青光眼患者之间无明显差异。 2.雌二醇(E2)含量(ng/L)比较 (1)实验组及对照组血清中E2男性患者含量分别为39.99±4.98ng/L和43.41±6.65ng/L,t值为0.027(t<0.05)差异具有统计学意义;女性患者分别为21.88±3.59ng/L、24.10±3.50ng/L,t值为0.022(t<0.05)差异具有统计学意义;实验组血清中E2含量明显低于对照组。 (2)原发性开角型及闭角型青光眼血清中E2含量男性患者分别为38.41±5.34ng/L和39.59±3.63ng/L,t值为0.170(t>0.05),差异无统计学意义;女性患者分别为21.92±4.24ng/L和21.86±3.19ng/Lng/L,t值为0.082(t>0.05),差异无统计学意义;两种类型原发性青光眼患者间E2含量无明显差异。 3.HSP27抗体与E2含量相关性分析 (1)原发性青光眼女性及男性患者血清中HSP27抗体与E2含量相关性分析P值为分别为0.001和0.004(P<0.05),有相关性,相关系数r值分别为0.625和0.570;原发性青光眼患者血清中HSP27抗体与E2含量呈正相关。 (2)白内障女性及男性患者血清中HSP27抗体与E2含量相关性分析P值分别为0.092和0.085(P>0.05),无相关性;白内障患者血清中HSP27抗体与E2含量无相关性。 4.视野缺损程度与HSP27抗体含量相关性分析,轻、中、重度视野缺损P值分别为0.088、0.075、0.103(P>0.05),无相关性;视野缺损程度与HSP27抗体含量无相关性。 结论: 1.原发性青光眼患者血清中HSP27抗体高表达,HSP27抗体的产生可能参与并加速RGCS的凋亡。其稳定高表达状态的特征可能成为原发性青光眼的一项特异性指标。 2.原发性青光眼患者体内雌二醇含量较对照组低,雌激素表达的下降可能成为原发性青光眼病程进展的诱发因素。 3.原发性青光眼患者血清中HSP27抗体与E2含量呈现正相关,其中女性患者相关性更为明显,为雌激素促进HSP27的磷酸化提供临床证据,两者可能协同发挥抗凋亡效应及视神经保护作用。