近十年来，随着分子生物学飞速发展，人们对肝癌发病原因及发病机理又有了新的认识，在此基础上，各种基因治疗手段取得突飞猛进的发展，包括癌基因、抑癌基因、自杀基因、多药耐药基因、细胞因子基因等，其中共刺激分子基因治疗的研究尽管历史非常短，却由于其确实的疗效及良好的应用前景而引起人们的重视，成为近几年肿瘤基因疗法研究中的热门课题。 在抗肿瘤免疫中，无论是在体内诱发主动免疫，还是进行过继免疫来治疗肿瘤，这都涉及T淋巴细胞的激活和数量扩增的问题，其中细胞毒性T细胞（CTL）无论是体内主动免疫还是体外过继免疫都起主要作用。而CTL发挥作用必须有特异性抗原预先致敏，抗原致敏的CTL能特异地溶解杀伤带有相应抗原的肿瘤细胞，并受MHCI类抗原限制，即只杀伤与自己有相同MHCI类抗原的肿瘤细胞，肿瘤抗原兼有自身抗原及新抗原的双重特性，免疫原性低，诱导特异性CTL反应需要有辅佐细胞参与，其中B细胞的辅佐作用日益受到重视，表达于T细胞表面的CD28与表达于B细胞表面的B7相互作用是诱导肿瘤特异性CTL的第二信<WP=75>号，CD28与B7交联可刺激T细胞合成多种细胞因子，如IL-2、TNF等增强机体基本抗肿瘤免疫过程并避免产生免疫无变应性，Aulison认为，根据双信号理论，肿瘤细胞本身即是第一信号，只要有了共刺激分子提供的第二信号，即能诱导机体产生有效的抗肿瘤免疫反应。同时也解释了机体对于肿瘤细胞的免疫监督功能，即宿主细胞在受致瘤因素作用后发生恶性转化时会表达B7分子，从而诱发机体产生有效的抗肿瘤免疫反应，另一方面那些不表达B7分子的肿瘤细胞则逃脱了机体的免疫监督而易于形成肿瘤，这说明共刺激分子在肿瘤细胞上表达的重要性，而研究表明，多种恶性肿瘤细胞不表达B7分子。基于上述研究成果，国内外多家研究室先后开展了恶性肿瘤的共刺激分子基因疗法的研究，其基本思想是利用转基因技术使缺乏B7分子的肿瘤细胞表达B7，目前已建立起表达B7的人恶性黑色素瘤细胞，人小细胞肺癌细胞等肿瘤细胞系，对这些肿瘤的治疗做出了巨大的贡献。但尚未见报道针对于肝癌细胞的此类研究，且既往的转基因方法多采用逆转录病毒为载体。这涉及病毒感染效价及包装细胞等多方面问题，本实验以免疫原性很弱的小鼠及人肝癌细胞为靶细胞，研究导入B7-1基因对其免疫原性的影响及其诱导的抗瘤效应。结果显示，与野生型和模拟转染的肝癌细胞相比，B7-1基因转染的肝癌细胞在体外能较有效地刺激淋巴细胞增殖，诱导针对野生型肝癌细胞的特异杀伤活性，同时发现B7-1基因导入弱免疫原性的肝癌细胞能增强其免疫原性，在<WP=76>体内能较有效地诱导抗肿瘤免疫反应。这一结果符合T细胞活化的双信号学说，B7-1在肝癌细胞中表达可提供共刺激信号，与第一信号Ag/MHC-1共同诱导T细胞活化，有利与诱导抗肿瘤反应的产生。第二篇中利用脂质体介导的DNA转移技术将人B7-1基因导入人肝癌细胞smmc7721，建立起表达B7-1分子的细胞株B7+smmc7721，可用以体外传代培养高效特异的CTL，这在人肝癌的过继免疫治疗方面具有深远意义，本实验目前尚处于体外实验阶段，进一步的临床应用试验可从两方面进行，第一、针对中晚期肝癌患者及预防肝癌切除术后复发建立特异CTL细胞库进行过继免疫治疗，第二、制备新型瘤苗应用于人主动免疫。