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目的:本研究通过检测EV71感染手足口病(HFMD)患儿的人类白细胞抗原G(HLA-G)14bp插入/缺失多态性、血浆可溶性HLA-G(sHLA-G)及IL-6、10水平，探讨其与儿童EV71感染的相关性。
方法:采集185例疑似HFMD患儿咽拭子标本进行实时荧光RT-PCR检测EV71-RNA;采用PCR结合高分辨熔解曲线(HRM)技术，对125例EV71感染HFMD患儿及133例正常对照儿章进行了HLA-G14bp插入/缺失多态性的检测；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了81例EV71感染HFMD患儿及133例正常对照儿童血浆中sHLA-G水平；采用ELISA检测了64例EV71感染HFMD患儿及24例正常对照儿章的血浆IL-6、IL-10水平。应用SPSS17.0软件进行数据统计处理，分析HLA-G14bp插入/缺失基因型多态性分布频率及血浆sHLA-G、IL-6、IL-10水平在不同组别之间的差异及其相关性。
结果:
1.185例疑似手足口病患儿咽拭子标本，实时荧光RT-PCR检测EV71-RNA阳性152例，阳性检出率为82.16％(152/185)。
2．克隆含14bp-/-纯合子基因和14bp+/+纯合子基因片段的质粒DNA作为HRM技术检测基因分型的对照，优化反应体系，成功建立了HRM技术检测HLA-G14bp插入/缺失突变的方法。
3．EV71感染HFMD组与正常对照组HLA-G14bp插入/缺失基因型多态性分布频率均符合遗传学的Hardy-Weinberg平衡定律。EV71感染HFMD组HLA-G14bp插入/缺失等位基因的频率分别为29.2％和70.8％，对照组分别为41.0％和59.0％，两组等位基因分布频率差异有统计学意义（x2=7.830，P=0.005，其中-14bp的OR值为：1.321;95％Cl：1.077-1.621;+14bp的OR值为：0.785;95％CI:0.666-0.925)。
4．EV71感染HFMD组HLA-G14bp插入/缺失基因型多态性14bp-/-、14bp+/-和14bp+/+的频率分别为49.6％、42.4％和8.0％，正常对照组分别为34.6％、48.9％和16.5％，两组基因型多态性分布频率差异有统计学意义(x2=7.850，P=0.020)。其中14bp+/+基因型与非14bp+/+基因型（包括14bp+/-和14bp-/-）两组间的分布频率差异有统计学意义(x2=4.327，P=0.038)；14bp+/-基因型与非14bp+/-基因型（包括14bp+/+和14bp-/-）两组间的分布频率差异无统计学意义(x2=0.024，P=0.876)；14bp-/-基因型与非14bp-/-基因型（包括14bp+/+和14bp+/-）两组间的分布频率差异有统计学意义(χ2=5.968，P=0.015)。
5．EV71感染HFMD组血浆sHLA-G水平(U/mI)(M=88.6，P5=9.71，P95=148.98)明显高于正常对照组(M=15.37，P5=3.67，P95=60.18)，经Mann-WhitneyU检验差异有统计学意义(Z=-9.104，P=0.000)。EV71感染危重型组血浆IL-6水平(pg/ml)(M=12.70)高于重型组血浆IL-6水平(M=5.21)，经Mann-WhitneyU检验差异有统计学意义（Z=-2.516，P=0.012）：EV71感染危重型组血浆IL-10水平(pg/ml)(M=147.00)高于重型组血浆IL-10水平(M=31.75)，经Mann-WhitneyU检验差异有统计学意义(Z=-2.408，P=0.016)。
6．EV71感染HFMD组不同HLA-G14bp插入/缺失基因型间IL-6、IL-10差异均无统计学意义(H=0.361，P=0.835;H=1.124，P=0.570)。EV71感染HFMD组血浆sHLA-G水平与血浆IL-6、IL-10水平也无明显关联(r=0.235，P=0.333;r=0.257,P=0.289)。
结论:
1．本研究建立的基于HRM技术检测HLA-G14bp插入/缺失基因突变的方法具有简便、快速等优点。
2．HLA-G14bp插入/缺失基因型多态性与儿章EV71感染HFMD的发生有关联，携带14bp-/-基因型或缺失14bp等位基因的儿章可能更易发生EV71感染HFMD。
3．EV71感染HFMD组的血浆sHLA-G水平明显高于正常对照组，提示sHLA-G参与了EV71感染HFMD的发生发展过程，血浆sHLA-G水平可作为EV71感染HFMD的辅助诊断指标。EV71感染危量型组血浆IL-6、IL-10水平高于EV71感染重型组，提示IL-6、IL-10对评估疾病的严重性有一定的参考价值。
4．HLA-G14bp插入/缺失基因型多态性及血浆sHLA-G水平与EV71感染HFMD患儿的IL-6、IL-10没有明显关联，提示可能存在其它的机制或因素影响EV71感染HFMD患儿的免疫反应状态，还有待于更深入的研究。